细胞外泌体质谱

外泌体中常见的细胞质蛋白是Rabs蛋白，是鸟苷酸三磷酸酶家族的一种。它可以调节外泌体膜与受体细胞的融合，有文献报道称RAB4,RAB5和RAB11主要出现在早期以及回收的核内体中，RAB7和RAB9主要出现在晚期的核内体。现有大量的研究发现外泌体中含有40种RAB蛋白。除了RAB蛋白，外泌体中富含具有外泌体膜交换以及融合作用的膜联蛋白（包括膜联蛋白1、2、4、5、6、7、11等）。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族（CD63,CD81和CD9)）、热休克蛋白家族（(HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些细胞特异性的蛋白包括A33（结肠上皮细胞来源）、MHC-Ⅱ(抗原提呈细胞来源)、CD86(抗原提呈细胞来源)以及乳凝集素（不成熟的树突状细胞）。外泌体发挥功能：将细胞或组织中多余的或者有害的分子排除，这为研究生物标志物提供了可能。外泌体膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。细胞外泌体质谱

外泌体的相关成分：1、外泌体的膜同细胞一样，是磷脂双分子层。2、外泌体膜含有MHC-1/2蛋白，能绑定特异性的肽链。3、外泌体膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。4、外泌体膜中有膜转运融合蛋白annexins、RAN、GTPases。5、外泌体膜上有脂质筏Chol、ceramide、SM、PC，限制膜流动，参与包括跨膜信号转导、物质内吞、脂质及蛋白定向分选的多种功能。6、外泌体中含有核酸，包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA；同时还有一些蛋白、脂类也能被包裹到外泌体中。7、与外泌体产生相关的重要分子：Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。8、一些物质进行外泌体中是特异性的：如hnRNPA2B1能结合lncRNA或miRNA特异性的序列（GGAG/CCCU），进行主动包埋。北京CD9外泌体慢病毒随着外泌体研究的不断深入，它的应用已经涉及医学基础和免疫领域、寄生虫领域。

质膜的连续内陷较终导致多泡体的形成，多泡体可与细胞内的其他囊泡和细胞器交叉，从而增加了外泌体成分的多样性。根据细胞来源的不同，细胞外囊泡，包括外泌体，可以包含细胞的许多成分，包括DNA、RNA、脂质、代谢物、胞质和细胞表面蛋白。目前产生外泌体的生理目的尚不清楚，需要进一步研究。一个推测的作用是外泌体可能从细胞中去除多余和/或不必要的成分以维持细胞内环境的稳定。近来的研究也表明外泌体中特定细胞成分的功能、靶向、机制驱动的积累，提示它们在调节细胞间通讯中发挥作用。

外泌体是分泌的细胞外囊泡的主要群体，是具有生物活性的脂双层囊泡，大小约为30-100nm，由不同类型的正常细胞和瘤子细胞自然产生和释放。这些囊泡在细胞间通讯中起重要作用，并影响细胞外环境和免疫系统反应。外泌体通过内体途径分泌到细胞外空间，并将各种生物活性分子（货物）转运至靶细胞。外泌体货物的组成非常多样化，包括各种免疫阻止和免疫刺激蛋白、趋化因子、细胞因子、细胞受体、脂质以及不同的核酸，例如miRNA和环状RNA。外泌体的提取的方式：密度梯度离心法。

AFC自动收集器是将qEV分离法这一过程自动化的仪器，将用来收集外泌体样本的微量离心管放置在AFC的中间转盘内，根据称重精确测量流体体积，可精确的测量到样品中每一个液滴的重量并精确测量总重量。将在空隙体积之前从qEV柱洗脱的流体收集到AFC转盘的单独中心孔中并送至废液桶，避免将不需要的空隙部分收集到微量离心管中。在提取期间，当达到设定的提取体积后，转盘会自动旋转到下一个微量离心管继续收集，到收集完成后自动停止。微滴式数字PCR技术不佳有效提高了核酸分子的扩增效率，而且由于采用微滴计数的方法进行定量，可以不依赖与RT-PCR的荧光信号和Ct值，对所测样品中的核酸分子进行一定定量。NTA技术已被作为外泌体表征手段之一。牛奶提取试剂盒方法

基于外泌体的液体活检在病症和其他疾病的诊断和确定预后方面具有潜在的应用价值。细胞外泌体质谱

细胞摄取诊疗性外泌体：从树突状细胞、成纤维细胞和间充质细胞中分离出的诊疗性外泌体可对靶细胞产生特定的作用，包括新抗原呈递、免疫调节和药物有效载荷传递。诊疗性外泌体对靶细胞的影响可能是通过不同的进入或相互作用机制来控制的。完整的外泌体的进入可能包括受体介导的内吞作用、网格蛋白包被小凹、脂筏、吞噬作用、小凹和大胞饮作用。外泌体的内容物的进入或外泌体信号的诱导可能涉及配体受体诱导的细胞内信号或融合，从而将外泌体内容物沉积到细胞质中。细胞外泌体质谱

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