超速离心法既耗时又费力。现在您可以通过使用灵活可控的总外泌小体分离试剂,从不同的起始样本中方便地富集完整的外泌小体。这些试剂及其配套的试验方案完美适用于普遍的实验计划,包括小输入样本量和多种样本处理实验。从培养细胞中富集的总外泌小体(使用总外泌小体分离试剂或超速离心)可以通过免疫磁性捕获法进一步纯化为亚组分。可使用基于Dynabeads?的CD63特异性试剂,或将链霉亲和素试剂与特定的生物素化抗体结合使用,可基于表面抗原的免疫反应纯化得到任何所需的亚组分。外泌体在哺乳期的免疫调节过程中起到重要的作用。四川云序外泌体全转录测序
除此之外,细胞还可以释放膜囊泡,外泌体与微泡就是其中两种,二者相似但形成方式不同:外泌体是细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中的膜囊泡,而微泡则是细胞出芽与细胞膜融合后直接脱落形成的囊泡,且外泌体大小均一,直径在40~100nm,其大小取决于其起源部位以及细胞中的脂质双层结构;而微泡大小不一,直径在50~1000nm之间。外泌体的组成:外泌体主要含有融合蛋白和转运蛋白、热休克蛋白(HSP70)、CD类蛋白以及磷脂酶和其他脂质相关蛋白,但是不同来源的外泌体的组成有差异。天津服务外泌体结果外泌体核酸包括诸多种类的long RNAs和以microRNA为dai表的small RNAs。
奥沙利铂耐药性是结直肠ai医治中的一大挑战,调节性T细胞(Treg)的免疫抑制作用可能在其中发挥作用。另外,外泌体中的miRNA可能作为预测化疗敏感性的潜在生物标志物。天津医科大学的巴一团队及应国光团队在MolecularTherapy上发表的一项较新研究,发现结直肠ai细胞通过外泌体分泌的miR-208b可抑制CD4+T细胞中的PDCD4表达,以促进Treg扩增,从而导致结直肠ai小鼠模型对奥沙利铂医治的耐药性。另外,在结直肠ai患者中,miR-208b的高表达与较差的预后相关。
目前,外泌体的分离多采用超速离心、磁珠免疫捕获、沉淀或过滤三种方法。超速离心:耗时耗力,往往需要8-30个小时;每次较多只能处理6个样品;需要大量的起始材料;产量不高。需一台超速离心机。将欲提取的细胞培养上清液10ml,在4℃的环境下,300×g10min,2000×g20min,弃沉淀,去除细胞;然后l0,000×g30min,弃沉淀,去除亚细胞成分;再用10,000×g60min,弃掉上清液,较后所得沉淀既为exosome,用30mlPBS溶液重新悬浮沉淀物,混匀后再以10,000×g60min,用lmlPBS溶液悬浮沉淀物提纯的exosome溶液分别装入eppendorf管内,置于-80℃冰箱内保存备用。密度梯度离心法:用此种方法分离到的外泌体纯度较高,但是前期准备工作繁杂。
外泌体由细胞分泌释放出来,在血液等体液内传播,较后又可被其他细胞吞噬,是细胞间通讯的重要介质。越来越多的证据表明,宿主细胞或tumour细胞分泌的外泌体参与了tumour发生、生长、侵袭和转移。免疫细胞和tumour细胞之间通过外泌体进行信息交换,这种通讯方式在调节tumour免疫中发挥了双重作用。外泌体既可以通过抑制免疫细胞(DCs、NK细胞、CD4+和CD8+T细胞等)引发的抗tumour反应,以及诱导免疫抑制或调节细胞群(MDSCs、Tregs和Bregs)的免疫抑制。外泌体富含胆固醇和鞘磷脂。甘肃云序生物外泌体LncRNA测序
外泌体可提供特殊的核酸且起到运输功能。四川云序外泌体全转录测序
纳米颗粒跟zong分析技术(Nanosight Tracking Analysis,NTA)是一种比较新颖的表征纳米颗粒的方法,它可直接并实时观测纳米颗粒。NTA 通过光学显微镜收集纳米颗粒的散射光信号,拍摄一段纳米颗粒在溶液中做布朗运动的影像,对每个颗粒的布朗运动进行追zong和分析,从而计算出纳米颗粒的流体力学半径和浓度。 通过SDS-PAGE电泳分析得到Exosome中蛋白的含量及种类;通过Western-Blot检测Exosome中特定的蛋白表达情况。外泌体可被大多数细胞分泌,并分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液中。外泌体中不仅包含蛋白质成分,还包括一些RNA成分。四川云序外泌体全转录测序
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