外泌体的分离方法包括差速离心法、ExoQuick外泌体快速提取试剂盒法、免疫亲和沉降法、蔗糖密度梯度-超速离心法和微流体分离法等。其中差速离心法是较常用的外泌体分离方法,即通过较低的离心速度从培养基中分离出颗粒较大的物质,然后外泌体、小胞外囊泡及蛋白质再以非常高的速度(100000×g)离心产生沉淀。因此,差速离心只能富集而不能纯化外泌体。富集的外泌体、小胞外囊泡及蛋白质通过生物化学、质谱或电子显微镜等相关技术进行物理、化学及生物表征,从而得到进一步鉴别。人体几乎所有类型的细胞都能分泌外泌体,外泌体普遍存在并分布于各种体液中。海南分析外泌体miRNA测序
转移导致绝大多数的结直肠ai(CRC)相关死亡,但目前对CRC原发灶中转移起始细胞的具体特征和潜在机制知之甚少,而环状RNA(circRNAs)是否参与其中也尚不明确。来自中山大学的谢丹研究团队较新发表在MolecularCancer的研究揭示了名为circLONP2的环状RNA(circRNAs)在CRC进展过程中是关键的转移启动分子。circLONP2通过调控miR-17的细胞内成熟和细胞间转移,导致原发部位的转移启动能力扩散,加速tumour细胞跨器guan转移。circLONP2或可作为CRC医治中的预后预测因子和新的抗转移医治靶点。海南分析外泌体LncRNA测序外泌体在病毒和朊蛋白等多种病原体之间起着独特的作用。
目前,外泌体的分离多采用超速离心、磁珠免疫捕获、沉淀或过滤三种方法。超速离心:耗时耗力,往往需要8-30个小时;每次较多只能处理6个样品;需要大量的起始材料;产量不高。需一台超速离心机。将欲提取的细胞培养上清液10ml,在4℃的环境下,300×g10min,2000×g20min,弃沉淀,去除细胞;然后l0,000×g30min,弃沉淀,去除亚细胞成分;再用10,000×g60min,弃掉上清液,较后所得沉淀既为exosome,用30mlPBS溶液重新悬浮沉淀物,混匀后再以10,000×g60min,用lmlPBS溶液悬浮沉淀物提纯的exosome溶液分别装入eppendorf管内,置于-80℃冰箱内保存备用。
外泌体(Exosomes)是一种直径在40-100 nm的圆形单层膜结构,是细胞外泌囊泡中体积较小的一种。外泌体可被大多数细胞分泌,并分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液中。外泌体中不仅包含蛋白质成分,还包括一些RNA成分,如微小RNA ( microRNA,miRNA)、长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)、mRNA和环状RNA(circular RNA,circRNA)。外泌体可被大多数细胞分泌,并分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液中。外泌体中不仅包含蛋白质成分,还包括一些RNA成分。密度梯度离心法:用此种方法分离到的外泌体纯度较高,但是前期准备工作繁杂。
外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30-150nm),现今,其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年,外泌体于绵羊网织红细胞中被发现,1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体,且外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。广西云序外泌体平台
外泌体大小均一, 直径在40~100 nm。海南分析外泌体miRNA测序
多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。 所有培养的细胞类型均可分泌外泌体,且外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。 有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。 外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡,参与细胞间通讯,对外泌体的研究兴趣日益增长,无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。海南分析外泌体miRNA测序
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