DNA称脱氧核糖核酸,是一种分子,双链结构,由脱氧核糖核苷酸(成分为:脱氧核糖、磷酸及四种含氮碱基)组成。可组成遗传指令,引导生物发育与生命机能运作。主要功能是长期性的资讯储存,可比喻为“蓝图”或“食谱”。RNA称核糖核酸,是以DNA的一条链为模板,以碱基互补配对原则,转录而形成的一条单链,主要功能是实现遗传信息在蛋白质上的表达,是遗传信息传递过程中的桥梁。RNA的碱基主要有4种,即A腺嘌呤,G鸟嘌呤,C胞嘧啶,U尿嘧啶。其中,U尿嘧啶取代了DNA中的T胸腺嘧啶而成为RNA的特征碱基。RNA是核糖核酸,DNA是脱氧核酸。区别:1.两性解离:DNA无,bai只有酸解离,碱基被屏蔽(在分子内部形成了H键)。RNA有,有PI。2.粘度大:DNA;RNA,粘度由分子长度/直径决定,DNA为线状分子,RNA为线团。3.碱的作用:DNA耐碱RNA易被碱水解。4.显色反应:鉴别DNA和RNA+浓HClRNA------→绿色化合物DNA------→蓝紫色化合物苔黑酚。二苯胺啡啶溴红(荧光染料)和溴嘧啶都可对DNA染色,原理是卡在分子中,DNA的离心和电泳显色可用它们。植物RNA提取试剂产品特点:RNA纯度更高,无杂质残留,特别适合于对纯度要求很高的下游实验。太原RNA提取试剂厂家
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一种总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细胞,压制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。Trizol作用原理:在匀质化或溶解样品中,Trizol试剂可保持RNA的完整性,同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后,裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。水相转移后,RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后,用乙醇可从中间相沉淀得到DNA,加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。济南RNA提取试剂厂家供应在提取时,实验人员需要佩戴口罩和手套等各种防护装备,以防实验室污染。
拭子RNA提取试剂的选择?1、产品价格。价格也是选购产品的重要考量因素。对于绝大多数实验如Northern杂交、RT-PCR、RealTimeRT-PCR、cDNA文库构建等,国产试剂盒都能满足质量要求。与国外有名品牌相比,国产试剂盒的价格较为便宜,价格还不到国外品牌价格的30%,性价比较高。因而,对于以上实验建议选用国产试剂盒。一些经费不是很多的课题研究或样本量较大的临床检测项目,特别适合选用国产试剂盒。2、与国外有名品牌相比,国产试剂盒在拭子RNA提取纯度上略有不足,但不影响大多数实验,特别是下游需要PCR扩增的实验和分子杂交类实验。在提取得率上,国内试剂盒与国外品牌差别不大,而在价格方面,国产试剂盒具有比较明显的优势。如果经费充足,RNA纯度要求特别高,可考虑选择Q等国外有名品牌。如果经费不多或下游主要做PCR或分子杂交等实验,可考虑选择性价比较高的国产品牌。
RNA试剂盒:用于各种植物、动物、微生物的RNA提取,在每个试剂盒里都有一份说明使用说明书。实验者只需要按照说明书上的步骤操作即可。使用时无需配制其它试剂,非常方便,适合于RNA的快速提取。所提取的RNA完整性好、纯度高,可用于分子生物学后实验。但较好的试剂盒价格比较贵,在实验室可以根据自己的实验需要来定夺试剂盒的使用。注意事项所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品,操作过程要小心,带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间,但这并不表示RNA不纯,需电泳检测。马铃薯块茎,苹果,西瓜果肉,猕猴桃,梨,月季等,中快速提取总RNA,同时可以处理大量不同样品。
提取RNA的详细步骤:首先,将研钵晾干够,倒入1/3体积的液氮,加入0.2g均质的植物材料,充分研磨后转入一个含有300微升GMT的1.5ml的离心管中,摇匀。然后,加入30微升2mol/lNaAc进行摇匀,加入300微升酸酚摇匀,加入100微升的氯仿摇匀。然后,在四摄氏度12000r/min下离心二十分钟,吸取上清液的3/4,加入等体积的异丙醇,于冰上放置十五分钟。然后,在四摄氏度12000r/min下离心十分钟,将沉淀悬浮于含100微升的4mol/lLiCl小试管中,于-20摄氏度下放置过夜。然后,在4摄氏度13000r/min下离心10-15min,将沉淀溶于0.4mlDEPC处理水中,加入1/2体积氯仿和1/2体积酸酚,摇匀,进行抽提,在4摄氏度13000r/min下离心五分钟。将上清液中加入等体积的氯仿摇匀,进行抽提,在四摄氏度13000r/min下离心五分钟,上清液中加入1/10体积3mol/lNaAc和两倍体积的午睡乙醇与-20摄氏度放置一小时。植物RNA提取试剂:提取的总RNA纯度极高,没有蛋白和其他杂质的污染。宁波RNA提取试剂报价
排除其它核酸分子(DNA)的污染。太原RNA提取试剂厂家
RNA提取:主要试剂Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞,压制细胞释放出的核酸酶。1.Trizol试剂含有苯酚,具有毒性和刺激性,注重操作。2.RNase污染的主要来源是操作过程中手和空气中的浮沉,注重配带手套,样品尽可能盖严。3.细胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全会降低较后得率,因为一部分RNA会残留在未裂解的细胞中。细胞裂解之后要看不见颗粒状物质(结缔组织和骨除外)。在清洗和裂解细胞时较好在低温下操作,防止在操作过程中释放的内源RNase降解了RNA。4.酵母和一些细菌由于细胞壁的特别结构,可以加入Trizol试剂同时加入无RNase的玻璃珠并剧烈振荡,使细胞裂解充分。2-8℃避光保存一年。太原RNA提取试剂厂家
RNA提取关键点病菌RNA在提取后也仍然具有传染性,在提取时,实验人员需要佩戴口罩和手套等各种防护装备,以防实验室污染。而有种「自动灭活」的方法,在更加便利的同时,也能更好的保护实验人员的安全。许多样品中含有高水平的RNase,这种酶也会加速RNA的降解。为了使这种酶对降解的影响较小化,较好在采集时就稳定好样本中的RNA。这种情况下,可以在裂解缓冲液中立即进行溶解。比如可以通过TRIzol®、RNA裂解缓冲液等使RNase失活,然后再处理样本。另外,再采集样本之后马上加入DNA/RNAShield,可以快速降解掉RNase等蛋白物质。当然,DNA/RNAShield也会保证取样时微生物基因多样...