准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用2-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL离心管。转染细胞:直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染3h后,添加?体积的包含30%血清的生长培养基。更多关于Polysciences产品,欢迎咨询上海曼博生物!PEI转染试剂是一种阳离子聚合物转染试剂。线性PEI转染试剂价格
PEI在于可以应用于体内试验。当初试验经费很有限,被逼无奈只能放弃脂质体2000,选择PEI,以至于相当长的时间内,转染试验都不顺利。下面是几点关于PEI转染的注意要点:1.PEI的使用量可以参照脂质体2000的说明书,所用质粒尽量去内2.转染时,一定要把PEI+DMEM加入到质粒+DMEM中,顺序不可错,轻微混匀,静止20min3.转染后4小时,一定要换液!换含有FBS的完全培养液!因为PEI对细胞毒性太大4.如果后续试验涉及到稳定筛选,建议把血清浓度适当提高。PS:事实证明,PEI是可行的,已经做出稳定细胞系了。293细胞PEI转染试剂蛋白产量如何优化PEI转染试剂转染时的比例?
瞬时转染方法1.接种细胞:转染前,用胶原酶消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,总体积如表1所示,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用2-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL离心管。更多关于Polysciences产品,欢迎咨询上海曼博生物!
瞬时转染方法1.接种细胞:转染前一晚,用胶原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL离心管。PEI转染试剂使用的注意事项有哪些?
稳定转染方法1.接种细胞:转染前,用胶原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比,每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同)。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL离心管。3.转染细胞:直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染1.5h后,添加½体积的包含30%血清的生长培养基。
PEI转染对复合物孵化的时间是有要求的,一般建议5~20分钟之间。293细胞PEI转染试剂使用注意事项
PEI转染试剂可以转染哪些细胞?线性PEI转染试剂价格
稳定转染方法:
1.接种细胞:转染前,用胶原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比,每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同)。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL离心管。 线性PEI转染试剂价格
上海曼博生物医药科技有限公司拥有生物医药科技(人体干细胞、基因诊断与zhiliao技术开发和应用除外)领域内的技术开发、自有技术转让,并提供相关的技术咨询和技术服务;计算机软件的开发、设计、制作(音像制品、电子出版物除外)、销售自产产品;实验室试剂及耗材(药品、危险品除外)、化工原料及产品(除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用baozha物、易制毒化学品)、仪器仪表、机械设备、电子设备、塑料制品、玻璃制品、办公用品、电子产品的批发、进出口、佣金代理(拍卖除外)。【依法须经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动】等多项业务,主营业务涵盖血小板裂解液,WB自动孵育系统,微流控器官芯片,蓝牙无线标签机。公司目前拥有专业的技术员工,为员工提供广阔的发展平台与成长空间,为客户提供高质的产品服务,深受员工与客户好评。诚实、守信是对企业的经营要求,也是我们做人的基本准则。公司致力于打造***的血小板裂解液,WB自动孵育系统,微流控器官芯片,蓝牙无线标签机。一直以来公司坚持以客户为中心、血小板裂解液,WB自动孵育系统,微流控器官芯片,蓝牙无线标签机市场为导向,重信誉,保质量,想客户之所想,急用户之所急,全力以赴满足客户的一切需要。
1.对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,在转染前两天铺板...
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