培养基在使用前通过高压或过滤灭菌。防止污染应该注意以下事项:确认工作细胞库是否被污染,确认毒种工作种子批是否被污染,确认所用培养基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用细菌、及支原体无菌试验来确认并排除。同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。实际生产中,可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养,48小时即可观察有无污染。其它:高压灭菌设备、过滤除菌设备均应进行验证,确保灭菌和除菌效果;前者应在投产前及其后的每6个月进行验证,后者应在每次除菌前、后进行验证工作(至少应在除菌后进行一次)。另外,应将有毒区与无毒区严格分开,并有各自独自的空气净化系统及孵室,有毒区对无毒区应保持相对负压,防止病毒对培养细胞(尤其是细胞库)的污染。培养基的实验室制备:正确制备培养基时微生物检验的较基础步骤之一。海南实验室培养基制备器
培养基的制备:复水时不得用铜锅或铁锅,以防有离子混入培养基中,影响微生物的生长;容器的大小需大于复水后培养基总体积的2倍以上,避免在加热溶解过程中,培养基溢出;含有琼脂粉的培养基,在加热溶解之前可以浸泡数分钟;加热培养基时一定要进行搅拌,特别是琼脂类培养基。为避免烧焦和沸腾溢出,对于少量的培养基很好使用沸水浴进行加热。烧糊的培养基营养物质被破坏,并可产生有毒物质,如发现焦化,或未溶解均匀前培养基有溢出,该培养基即不能使用,应重新制备。对于琼脂类培养基进行再融化时应使用沸水浴或流动蒸汽进行加热,很多只能加热两次,第二次再融化后仍未用完的培养基应弃去。河南培养基制备器厂家低渗溶液则使细胞吸水膨胀易破裂,因此,配制培养基时要掌握营养物质的浓度。
配制培养基需要哪些制备:(1)称出规定数量的琼脂和蔗糖,加水直到培养基较终容积的34,加热溶解,完全融解后的溶液是透明的。在配制液体培养基(不加琼脂)时无需加热。(2)按需要加入一定量的各种贮存母液,包括生长调节物质和其他特殊附加物。吸取母液要使用专一的移液管。如有必要,培养基中所需的维生素,可在高压灭菌之后通过减压过滤装置或微孔过滤器灭菌后再加入。(3)蒸馏水定容。充分混合后调节培养基的pH,一般以5.66.0为好。(4)培养基分装,分装量一般以占培养容器的1514为宜。之后在24h内完成高压灭菌,也可以高压灭菌后再进行培养基的无菌分装,室温下存放备用。暂时不用的培养基应放置于10摄氏度下保存,而含有生长调节物质的培养基在45摄氏度保存更佳。
干粉颗粒微生物培养基储存条件:通常情况下,干粉培养基和颗粒培养基产品,在室温干燥避光的储存环境中,并注意密封存放,避免产品阳光直射,室内湿度与温度太高,如不注意密封情况,颗粒粉末在会有结块和受潮的现象,所以使用后一定要拧紧盖子,注意防潮。关于储存时长,只要严格按照培养基厂家的标签要求存放,未开封的培养基可保存两至三年。我们平常使用时,干粉没必要放在冰箱里,但如果在制备当天打开培养基后没有用完,建议将其存放在冰箱中,减少受潮问题但不要放置太多天。总之没有开封的干粉、颗粒培养基存放在阴凉干燥处即可。控制培养基的条件,控制培养基的pH 配制培养基必须根据微生物的特点调节pH。
配制培养基的原则:调节氧化还原电位(Eh)各种微生物对培养基的Eh要求不同。适宜好氧微生物生长的Eh值一般为+0.3~+0.4V,厌氧微生物只能在+0.1V以下生长,因此,培养好氧微生物必须保证氧的供应,可在培养基中加入氧化剂提高Eh值。调节渗透压多数微生物能耐受较大范围渗透压的变化。培养基中营养物质的浓度过大,会使渗透压过高,使细胞发生质壁分离而抑制微生物生长。低渗溶液则使细胞吸水膨胀易破裂,因此,配制培养基时要掌握营养物质的浓度。常在培养基中加人适量的Nacl以提高渗透压。原料来源的选择力求节约:配制培养基还应遵循力求节约的原则,尽量选用价格便宜、来源方便的原料。特别是在工业发酵中,培养基用量大,更应注意利用低成本的原料,降低产品成本。异养微生物的合成能力较弱,不能以CO2作为碳源或主要碳源,故应在培养基中至少添加一种有机物。培养基灭菌 培养基制备器
在配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分。海南实验室培养基制备器
马铃薯培养基的分装:1.根据需要将培养基分装于不同容量的三角烧瓶、试管中。分装的量不宜超过容器的2/3以免灭菌时外溢。2.琼脂斜面分装量为试管容量的1/5,灭菌后须趁热放置成斜面,斜面长约为试管长的2/3。3.半固体培养基分装量约为试管长的1/3,灭菌后直立凝固待用。4.高层琼脂分装量约为试管的1/3,灭菌后趁热直立,待冷后凝固待用。5.液体培养基分装于试管中,约是试管长度的1/3。6.琼脂平板:将灭菌(或加热融化)后的培养基冷至50℃左右,以无菌手续倾人灭菌平皿内,内径225px的平皿倾注培养基约13~15ml,轻摇平皿底,使培养基平铺于平皿底部,待凝固后即成,倾注培养基时,切勿将皿盖全部启开,以免空气中尘埃及细菌落入新制成的平板培养基(简称平板),表面水分较多,不利于细菌的分离,通常应将平皿倒扣搁置于37℃培养箱内约30分钟待平板平面干燥后使用。海南实验室培养基制备器
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