CUT&Tag 技术的基本原理为:在抗体引导下,ChiTag 酶在目的组蛋白修饰标志、或转录因子、或染色质调控蛋白结合染色质的局部进行目的 DNA 的片段化,同时添加测序接头,并释放到细胞外,而绝大部分无关的染色质还留在细胞核内,因而整个实验的信噪比大幅提高,同时简化了实验步骤。该方法可一管式高通量应用,并可与单细胞测序平台"无缝"结合。ChiTag 酶在打断基因组的同时加上接头,不需要繁琐的补平加 A 加接头,在一个工作日内可以完成从细胞到测序文库制备全流程。通过Klenow酶修复转座产物的末端缺口。中国香港研究表观遗传组测序分析
案例:hMeDIP-seq揭示了心机细胞发育与肥大过程中的基因表达与5hmC有关 DNA hydroxymethylation controls cardiomyocyte gene expression in development and hypertrophy[J].Greco C M, Kunderfranco P, Rubino M, et al . Nature Communications, 2016, 7:12418. 5-hmC(DNA羟甲基化)在基因体上富集能够激huo基因的转录调控,但对启动子和远端调节区的功能不太清楚。本文主要是以不同发育时间点和心肌肥大的心肌细胞为实验载体,主要剖析5-hmC在心肌细胞(CMC)基因组中的分布,并揭示了5-hmC在心脏发育和疾病中的作用机制。1)通过DNA羟甲基化测序,作者发现在心脏发育过程中,CMCs中的5-hmC在基因间区域逐渐减少,并向GB上富集(图1)。2)通过DNA羟甲基化和转录组关联分析,作者得出5-hmC是CMCs发育和肥大过程中的重要调控因子(图2)。甘肃平台表观遗传组测序价格在治 疗过程中,ctDNA甲基化水平与ai细胞数量呈正比。
案例1:解析组蛋白修饰 原文:Epigenomic analysis of multilineage differentiation of human embryonic stem cells 期刊:Cell 影响因子:31.39 为了研究胚胎发育过程中的表观遗传调控,本文结合ChIP测序、甲基化测序和转录组测序,系统性地调查了人类胚胎干细胞在分化为不同类型细胞过程中的染色体修饰、DNA甲基化修饰以及转录组变化。通过各种测序数据的联合分析发现:胚胎发育早期活跃的启动子CpG含量比较高,并且在不表达的细胞中它们往往具有组蛋白H3K27me3修饰,从而维持抑 制状态。相反地,胚胎发育后期表达的基因的启动子CpG含量比较低,并且主要通过DNA甲基化维持抑 制状态。
不同于已经得到深入研究的基因组 DNA 的表观遗传修饰,ctDNA 的 5mC 甲基化修饰研究仍然是一个未被充分探索的领域,对于科研者来说是一个尚待挖掘的金矿。既然如此,那我们是不是可以按图索骥,直接将基因组 DNA 甲基化修饰研究的传统方法照搬到 ctDNA 的5mC 甲基化修饰研究上来呢?答案是否定的:因为 ctDNA 含量低、缺乏染色质结构的保护,若直接将研究基因组 DNA 的 5mC 修饰的传统方法应用于 ctDNA,则会遇到南橘北枳的困境,云序生物提供的MeDIP测序服务,将甲基化DNA免疫共沉淀技术(MeDIP)和高通量测序相结合,能够帮助客户快速地获取全基因组范围内的DNA甲基化图谱,并比较不同样品中的甲基化分布差异。该技术可以同时检测环状DNA和环状DNA的甲基化修饰状态。
乳腺ai转移确诊后,患者已经很少能够彻底痊愈。但是现在,我们可以利用含有tumsor染色体异质性的ctDNA来对乳腺ai进行检测。在H Saal教授的研究中,他们对20例早期确诊的原发性乳腺ai患者进行了监测和长期随访。通过NGS和液体数字PCR联合使用的方法,他们能够覆盖很多低信号的全基因组测序结果,并且first发现,在手术后,ctDNA监测是高度精确的,其成功监测预示了93%的复发病人以及100%的没有复发的病人。基于ctDNA的监测中,转移患者的平均生存期是11个月,而在患者的长期不进展期的时候,是没有检测到ctDNA的。因此,ctDNA能够预测不良生存期。这些发现表明,我们可以利用ctDNA来监测早期乳腺ai患者的转移情况,并帮助修改治疗方案,避免过度医治。但新的研究表明:无论是在正常体细胞还是ai细胞中,都存在大量染色体外环状DNA。浙江平台表观遗传组测序介绍
可以预见的是,环状DNA将迅速成为新的科研热点。中国香港研究表观遗传组测序分析
CUT&Tag(Cleavage Under Targets and Tagmentation)是蛋白质-DNA互作关系研究的新方法,是新一代超微量ChIP-Seq技术,适用于无ChIP级别抗体的蛋白研究。与传统的ChIP-Seq研究方法相比,该技术无需交联、超声打断、末端抹平和接头连接等操作,因此具有省时高 效、所需的样品量少、背景信号低和可重复性好等优点,甚至可用于单细胞水平测序。CUT&Tag有望将蛋白质-DNA互作的研究变成一种类似PCR反应的常规操作,对基因调控、表观遗传等领域的研究具有**性的意义。中国香港研究表观遗传组测序分析
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