比色法检测整体甲基化修饰

PNAS| 8-oxoG在mRNA中的积累可以改变哺乳动物细胞中的蛋白质翻译 发表时间：2018年4月17号 影响因子：9.412 PNAS杂志发表了来自国家老年医学中心、北京医院研究的一篇有关O8G氧化修饰改变哺乳动物细胞中蛋白合成的研究成果。文章题目为“Transcriptional mutagenesis mediated by 8-oxoG induces translational errors in mammalian cells”。 哺乳动物细胞内形成的活性氧可以在mRNA中产生8-oxoG修饰，这一氧化修饰在基因表达过程中会导致碱基错配。本研究首先构建了一种基于超敏荧光素酶Gluc（Gussia luciferase）的报告基因检测系统，通过第二代测序技术发现当RNA中8-oxoG含量增加使U-to-G位点增加，从而诱导表达淀粉样前体蛋白的淀粉样β肽（老年痴呆的重要标志物）。该研究结果表明，8-oxoG在mRNA中的积累可以改变哺乳动物细胞中的蛋白质合成。本论文的发表为深入氧化修饰与蛋白合成间的分子机理提供了全新的研究思路！适用于m6A RNA甲基化谱研究，快速筛选m6A RNA甲基化靶基因。比色法检测整体甲基化修饰

技术原理 为了系统性揭示RNA O8G氧化修饰，云序生物提供了成熟的 RNA O8G氧化MeRIP-Seq技术服务。技术原理如下：将RNA O8G氧化特异性抗体与被随机打断的RNA的片段进行共孵育，抓取有O8G氧化修饰的片段进行测序；同时需要平行测序一个对照（Input）样本，对照样本为未进行IP反应的RNA的片段。对照样本用于消除非特异性抓取O8G氧化片段的背景。对比免疫共沉淀IP样本和Input样本中的序列片段，将O8G氧化修饰位点定位到转录组上，并根据RNA-seq数据，计算样本中O8G氧化程度。 配合专业的生物信息学分析，云序生物可进一步提供高精度的O8G氧化图谱，帮助客户揭示O8G氧化在生物学功能和潜在的作用机制。比色法检测整体甲基化测序m7G MeRIP测序方式，采用预验证的商业化抗体和精心优化的实验流程，具有极高的效率和特异性。

植物m6A表观转录组修饰的生物学功能尚不完全清楚。CPSF30-L是聚腺苷酸化因子CPSF30的主要亚型，由CPSF30-S和一个m6A结合的YTH结构域组成。CPSF30-L的生物学作用及其在选择性聚腺苷酸化中结合m6A功能的分子机制尚不清楚。在这里，作者揭示了CPSF30-L是拟南芥m6A的“reader”，其m6A结合功能是花卉的转型和脱落酸(ABA)响应所必需的。此外，CPSF30-L的m6A结合活性增强了液体样核体的形成，其中CPSF30-L主要识别m6A修饰的远上游元件，调控聚腺苷酸化位点的选择。

在本研究中，作者对两个玉米(Zeamays)自交系转录组范围内的m6AmRNA分布和多聚体分析进行了平行分析，以评估m6A修饰与翻译状态的整体相关性。m6A位点普遍分布于数千个蛋白编码基因中，局限于一个共识基序内，主要富集于3’UTR区，且m6A修饰在调节替代聚腺苷酸位点的选择中发挥作用。更重要的是，m6A修饰根据其强度和基因位置显示了与翻译状态的多方面相关性。此外，在m6A修饰中观察到大量的种内变异，这种自然变异部分是由基因特异性表达和选择性剪接驱动的。总之，这些发现为鉴定玉米中受m6A修饰的转录本提供了宝贵的资源，并为更好地理解m6A在介导基因表达调控中的自然变异铺平了道路。采用类似ELISA抑 制竞争免疫的方法，实验样本和RNA甲基化标准品与RNA甲基化抗体共孵育。

Nature | miR-1的位置特异性氧化导致心脏肥大 发表时间：2020年8月5日 影响因子：42.778 Nature上发表的来自韩国高丽大学Sung Wook团队的一篇研究在氧化还原相关疾病心肌肥大的大鼠模型中对氧化的miRNA进行了特异性测序研究。 作者在氧化还原相关疾病心肌肥大的大鼠模型中对氧化的microRNA（miRNA）进行了特异性测序。结果发现8-氧代鸟嘌呤2（o8G）修饰是选择性地在miRNA的特殊区域（位置2-8）产生的，并通过o8G-A碱基互补配对来调节其他mRNA。用肾上腺素能激动剂医治后主要在miR-1（7o8G-miR-1）的第7位诱导了o8G氧化修饰。单独引入的7o8G-miR-1或7U-miR-1（其中7位的G被U取代）足以引起小鼠心脏肥大，o8G-miR-1的mRNA靶基因在受影响的表型中起作用，反之对小鼠心肌细胞7o8G-miR-1的特异性抑制可减轻心脏肥大。o8G-miR-1也与心肌病患者有关。本研究表明miRNA的位置特异性氧化可以作为表观转录机制来协调病理生理学氧化还原介导的基因表达，为研究氧化修饰在病理生理学中的作用提供了新的思路。m6A甲基化主要通过减少IAP mRNA的半衰期而起作用。陕西甲基化水平

对m6A RNA甲基化，目前较流行的检测手段为m6A-Seq技术。比色法检测整体甲基化修饰

案例3：m6ARNA去甲基化酶ALKBH5通过结合lncRNA促进胶质瘤细胞期刊：CancerCell影响因子：27.43近年来，m6ARNA修饰的研究已成为当今生命科学领域前沿研究之一，不断有高影响分子文章问世。m6ARNA修饰的催化、去除以及识别的分子机理研究越来越清晰，此时人们更关心m6ARNA修饰与重大疾病之间的相关性。近期CancerCell报道了m6ARNA去甲基化酶ALKBH5在神经胶质瘤中具有生理作用。在本研究中，去甲基化酶ALKBH5在恶性胶质瘤干性样细胞表达上调，而ALKBH5高表达的胶质细胞瘤患者预后生存率更差。通过敲低ALKBH5，meRIP鉴定m6ARNA甲基化修饰模式，基因芯片检测差异表达>2倍的基因，终筛选到与细胞周期调控相关的FOXM1基因，其在GSCs的自我修复和tumsour形成中起到关键作用。比色法检测整体甲基化修饰

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