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本发明涉及一种快速提取血液和口腔拭子基因组DNA的方法。背景技术：近年来，随着荧光PCR技术的不断成熟。该技术在科研及检验领域得到了应用，成为分子生物学领域不可或缺的一项重要技术。在进行遗传背景分析过程中，血液、唾液和口腔拭子成为重要的生物分析样本。但是，由于血液、唾液和口腔拭子中存在有很多PCR反应物，例如血液中含有血红素，蛋白质，脂肪，抗凝剂等，唾液和口腔拭子含有蛋白质，脂肪，抗凝剂等，使得用血液、唾液和口腔拭子直接进行荧光PCR反应变得尤为困难。因此，现在临床上往往先要从血液、唾液和口腔拭子样本中纯化出DNA，才能进行样本的DNA扩增。提取血液、唾液和口腔拭子基因组的方法种类非常多，传统酚氯仿抽提法，高盐盐析法，模离心柱吸附法，磁珠法，等等。经典的血液核酸提取方法包括几个过程。1.通过低渗液涨破红细胞，将血红素物质释放出来，然后离心，清洗去除血红素。2.通过裂解液裂解白细胞，释放核酸物质。3.通过离心柱或纳米磁珠特异性吸附核酸物质，去除其他杂质。4.通过漂洗液洗掉挂在离心柱或纳米磁珠表面的化学试剂残留和蛋白残留。5.加入洗脱液将核酸从离心柱或纳米磁珠上洗脱下来。 黑龙江鼻咽拭子口腔拭子源头直供口腔拭子应该可以承受4N的垂直于轴向的静压力。
本发明的特征在于：应用本发明的血液基因组DNA提取方法在10分钟内提取血液基因组可用于荧光PCR扩增检测，主要步骤如下。（1）将**管颠倒混匀后，吸取100μL血液或者吸取100μL口腔拭子样本保存液至，加入200μL的核酸释放剂，涡旋混匀，然后5000g离心30s，弃上清，获得细胞沉淀。（2）将步骤（1）中得到的血液细胞沉淀中再加入200μL核酸释放剂，涡旋振荡1min，至沉淀完全散开，然后5000g离心30s，弃上清。（口腔拭子样本则无需进行此步骤）。（3）向步骤（2）所获得的沉淀中加入50μL核酸释放剂，涡旋振荡1～2min；室温放置5min，12000g离心30s，取上清液即为提取的基因组DNA；所述的核酸释放剂组成为20mM～80mM的氢氧化钠溶液、～、～、～、～***钠、～3%甲酰胺；所述荧光PCR反应液组成为ROX、TaqMan探针、引物、dNTP、dUTP、UDG、BSA、聚合酶及缓冲液。附图说明图1为实例1检测的8份血液样本平行实验的荧光扩增曲线图。图2～图5为实施例1提供的四份血液样本的三次平行实验的荧光扩增曲线图。图6为实施例2对比实例1提供的对8份血液样本平行实验的荧光扩增曲线图。具体实施方式为了使本领域技术领域人员更好地理解本申请中的技术方案。
深圳市华晨阳科技有限公司（Huachenyangtech）深圳市华晨阳科技有限公司是一家拥有生物医学领域自研技术，专注于基因检测临床应用、检测试剂及自动化仪器研发生产的高新技术企业。中心团队由生物学、医学、遗传学、生物信息学等领域的**人才组成。主营业务涵盖：核酸建库测序、荧光定量PCR、基因芯片等创新体外诊断试剂的自主研发生产、医学研究、基因早诊早筛、生殖医学、遗传病、微生物、病原体、慢病及健康管理等临床技术解决方案，以及生物药原材料研发制备。华晨阳科技以成为精细医学国际化创新主体为目标，在深圳拥有1000多平米的综合性研发实验室与cGMP生产车间，以及**的研发实验室。深圳华晨阳科技致力于生物医药、临床检测试剂的自主创新和国产化，将大型人群队列样本转化为医学相关的基因大数据，为国内外生物产业提供更便捷更快速的前沿生物信息技术服务。公司产品原研技术、规范生产、精细检测。 口腔拭子取样**0分钟，不要吃东西，吸YAN，饮酒等。
深圳市华晨阳科技有限公司为中国香港晨阳国际集团旗下企业,本工厂专业生产经营：医疗器械（TOC取样拭子、***采样试子、DNA采样拭子、宫颈采样试子、咽喉采样试子、鼻腔采样拭子、妇女***采样刷、细胞保存液、细胞培养基、液基保存液、皮肤外用涂药器、微生物取样捧、阴道冲洗器.）工业净化产品：（无尘布、擦拭布/纸、净化棉签等）；电子产品。通过ISO9001，ISO14001，ISO13485，CE，CFDA认证产品应用于：微生物，制药，医疗器材，食品，微电子，光学，光电，磁盘，硬盘，半导体，晶圆，机电，实验室，研究所，汽车造船工业，航空航天领域等各个行业，覆盖范围广，主要产品有：无尘擦拭布、纸，无尘静电防护手套，清洁净化无尘棉签各种型号，***粘尘滚筒粘尘垫，防静电工作服套件，防静电包装袋，无纺布口罩、衣服、帽子、鞋套，清洁卡套件，除静电设备及净化设备工程等。代理日本WTR各种规格指套，美国Kimberly-ClarkKimtechPure各种擦拭布/纸，防护产品，日本东丽TORAYSEEMKMC 各种清洁抹布，savinaminimax无尘布，日本OZU&BEMCOT各种无尘擦拭纸，3M各种防护口罩，日本三洋HUBY-340系列无尘棉签，RubyStick系列净化棉签，FOAMTEC系列无菌棉签。这款口腔拭子经过抗菌剂的特殊处理，防止微生物污染。浙江鼻咽口腔拭子供应商家
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加入20μteinaseK溶液，混匀。加入200μL缓冲液GB，充分颠倒混匀，在56℃放置14min（期间颠倒混合样品数次），溶液应变清亮，若未完全变清亮，延长裂解时间至完全变清亮。加人200μL无水乙醇，充分振荡混匀10s，此时可能会出现絮状沉淀。将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。向吸附柱中加入500μLGD（已加入无水乙醇），12,000rpm离心30s，弃废液，将吸附柱CB3放回收集管中。向吸附柱中加入600μLPW（已加入无水乙醇），12,000rpm离心30s，弃废液，将吸附柱CB3放回收集管中。12,000rpm（~13，400×g）离心2min。将吸附柱放置新的，以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。向吸附柱中悬空滴加50～200μL洗脱缓冲液，室温放置2～5分钟，12,000rpm（~13，400×g）离心2min，将溶液收集到离心管中，测定浓度及纯度后，取3μL，加入到配制好的荧光PCR反应液，于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。用本发明和对照产品对8份样本同时进行荧光PCR扩增。结果如图6，本发明所有反应孔背景信号好、Ct值都在21～25之间，荧光扩增曲线呈典型的S型。上海海绵口腔拭子厂家直销
深圳市华晨阳科技有限公司是一家致力于核酸检测、分子诊断、医学检验、病毒检测等产品研发、生产、销售于一体的国家高新技术企业。公司拥有二十多项**，部分专利已经转化应用于市场。产品主要应用于基因检测、医疗机构、生物制药、大型甲等医院、出入境检验检疫、诊断试剂、疾控机构、刑侦法医鉴定等。近年来，公司不断加大自主研发投入，积极引进人才和技术，并与国内外多家科研机构、医学检验所以及三甲医院、基因检测公司、疾病预防控制中心等科研机构有着紧密合作，促进人类健康产业大发展。
