案例1: m6Am 测序揭示了人类转录组中 m6Am 甲基化的动态性 原文:m6Am-seq reveals the dynamic m6Am methylation in the human transcriptome 期刊:Nature Communication 影响因子:13.78 北京大学的研究人员开辟了一种新型的 m6Am 修饰 RNA 的测序方法,使用抗体拉取 5’ 帽子片段富集 m6Am 修饰的 RNA 区域,再在特定生化环境条件下使用 FTO 酶来区分 m6Am 与 m6A 修饰,进而可达到精细至单碱基水平的 m6Am RNA 测序。使用该方法对人类转录组测序的结果显示,m6Am 修饰的分布主要局限于 mRNA 5’ 帽子下游的翻译起始位点,并且多数具有 BCA 的序列 motif 特征(B=C/U/G)。对细胞施予热激、低氧等应激性刺激时,细胞转录组的 m6Am 水平有明显上升,说明 RNA 的 m6Am 动态修饰可能参与了细胞应激性反应。针对低氧环境刺激的进一步 GO 分析显示,m6Am 水平升高的基因与内质网应激调节的生物学过程有关。m6A甲基化已经被证明与植物对病原体的抗性有关。河南环状RNA甲基化
案例1:哺乳动物mRNA内m7G甲基化转录组图谱 期刊:Molecular Cell 影响因子:14.25 由于全部种类的反转录酶均无法将RNA m7G位点逆转录成对应发生碱基突变的cDNA,为了准确的探究RNA内m7G甲基化情况,何川团队利用m7G自带正电荷的特征,开发了新的m7G单碱基深度测序方法。该方法能够将RNA内含m7G位点转化为另一种可产生反转录碱基变异的新位点,并依据碱基变异率估计m7G位点的甲基化水平。此方法随后也被证实可检测18S rRNA中的1639位内含m7G位点以及可揭示人类细胞tRNA中的22个46位内含m7G位点。并观测到其在mRNA分布、富集的共有序列及其它统计特征与m7G-MeRIP-seq数据基本保持一致。该文章不仅揭示了m7G甲基化在人类细胞中的分布特征,同时还发现METTL1是一种甲基转移酶,它在mRNA中催化了m7G甲基化修饰,并表明m7G的内部甲基化可以影响mRNA的翻译。江西microRNA甲基化将甲基化RNA特异性抗体与被随机打断的RNA的片段进行共孵育。
云序优势 一站式服务: 客户只需提供细胞、组织或RNA,云序生物为您完成从MeRIP富集,文库制备,上机测序到数据分析整套服务流程。 样本要求 样品类型: 细胞、新鲜组织或RNA样品。其它类型样品请详询。 样品量: a) 细胞:2×107 b) 组织:100 mg-1 g c) RNA:30-300 μg(OD260/280:1.6-2.3;RNA无明显降解28S:18S>1.5或RIN>7) 样品运输与保存 样品运输:样品置于1.5mL离心管中,封口膜封好,干冰运输。 样品保存:细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理,液氮冻存后-80℃保存;RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中,-80℃保存,避免反复冻融。
目前还没有一种完善的方法可以在单碱基分辨率下对每个转录本进行m6A的鉴定,这对评估m6A丰度是必要的。作者开发了一种新的方法,称为Nanom6A,用于在单碱基分辨率下鉴定和定量m6A修饰,使用基于XGBoost模型的纳米孔直接RNA测序。并使用MeRIP-Seq和m6A-REF-seq验证了此方法,证实了较高的准确性。利用这种方法,作者进行了毛果杨茎分化木质部中转录组范围的m6A修饰定量分析,揭示了不同的可变聚腺苷酸化(APA)量会导致不同的m6A修饰比例。RNA m6A甲基化是RNA较关键的内部修饰之一。
植物中m6A修饰的研究主要集中在拟南芥的生长发育上。然而,拟南芥是一种盐敏感模式植物。因此,有必要对m6A修饰在高耐盐作物的盐胁迫响应中的作用进行研究。甜高粱是一种能源和饲料作物,非常适合在盐碱地生长。探讨m6A在甜高粱中的修饰对阐明作物的耐盐机理具有重要意义。在本研究中,作者检测了在耐盐性不同的两个高粱基因型(耐盐的M-81E和盐敏感的Roma)中m6A的修饰。甜高粱在盐胁迫下的m6A修饰发生了剧烈的变化,特别是在Roma中,一些耐盐相关转录本的m6A修饰增加,导致mRNA稳定性增强,进而参与了甜高粱耐盐性的调控。虽然m6A修饰对甜高粱的耐盐性具有重要的调控作用,但其调控活性受初始m6A修饰水平的限制。m7G RNA甲基化是在甲基化转移酶的作用下,使RNA鸟嘌呤(G)的第七位N上加上甲基的一种修饰。microRNA甲基化芯片
研究表明,m7G RNA甲基化修饰存在于各类分子中。河南环状RNA甲基化
ac4C RNA乙酰化是在RNA ac4C修饰酶的作用下,使N4位乙酰胞嘧啶发生乙酰化的一种保守的化学修饰(N4-acetylcytidine)。早期研究发现该修饰存在于真核生物中丝氨酸及亮氨酸tRNA和18S rRNA上,导致Watson-Crick碱基热稳定性增加,调控蛋白合成中的编码准确性;近期研究发现ac4C分布在人类转录组中,大多数位点出现在编码序列(CDS)内,并且通过改善的mRNA稳定性和翻译促进靶基因表达。目前,ac4C RNA乙酰化修饰作为一类新型RNA修饰,是继m6A修饰之后的又一表观转录组学热点和“超级潜力股”!河南环状RNA甲基化