m5C RNA甲基化分析

研究表明，RNAm6A修饰影响mRNA的转录、定位、翻译、稳定性、剪接和核输出。然而，转录组m6A谱及其在白菜热胁迫中的潜在生物学作用尚缺乏足够的资料。通过MeRIP-seq获得白菜中RNA m6A修饰的first转录组全谱。同时，通过分析Input测序数据获得转录组数据。发现在正常组(CK)和热应激组(T43)中鉴定出11252个m6A共有峰和9729个含有m6A的共有基因。且CK组和T43组中，m6A峰均在3’UTR区高度富集。大约80%的基因有一个m6A位点。m6A峰的共识基序为AAACCV (V: U/A/G)。此外，关联分析发现m6A的甲基化程度与转录水平存在一定的相关性，说明m6A在基因表达中起一定的调控作用。植物中m6A修饰的研究主要集中在拟南芥的生长发育上。然而，拟南芥是一种盐敏感模式植物。因此，有必要对m6A修饰在高耐盐作物的盐胁迫响应中的作用进行研究。甜高粱是一种能源和饲料作物，非常适合在盐碱地生长。将甲基化RNA特异性抗体与被随机打断的RNA的片段进行共孵育。m5C RNA甲基化分析

案例3：m6A RNA去甲基化酶ALKBH5通过结合lncRNA促进胶质瘤细胞 期刊：Cancer Cell 影响因子：27.43 近年来，m6A RNA修饰的研究已成为当今生命科学领域前沿研究之一，不断有高影响分子文章问世。m6A RNA修饰的催化、去除以及识别的分子机理研究越来越清晰，此时人们更关心m6A RNA修饰与重大疾病之间的相关性。近期Cancer Cell报道了m6A RNA去甲基化酶ALKBH5在神经胶质瘤中具有生理作用。在本研究中，去甲基化酶ALKBH5在恶性胶质瘤干性样细胞表达上调，而ALKBH5高表达的胶质细胞瘤患者预后生存率更差。通过敲低ALKBH5，meRIP鉴定m6A RNA甲基化修饰模式，基因芯片检测差异表达>2倍的基因，终筛选到与细胞周期调控相关的FOXM1基因，其在GSCs的自我修复和tumsour形成中起到关键作用。外泌体甲基化差异分析m7G RNA甲基化修饰作为一类新型RNA甲基化。

样本要求 样品类型 细胞、组织或RNA，其他样本类型请电询。 样品量 a) 细胞：1×108 b) 组织：500 mg - 5g c) RNA：100 μg - 300 μg (OD260/280：1.6-2.3; RNA无明显降解) 样品运输及保存 样品运输：样品置于1.5mL离心管中，封口膜封好，干冰运输。 样品保存：细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理，液氮冻存后-80℃保存；RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中，-80℃保存，避免反复冻融。云序优势 一站式服务： 客户只需提供细胞、组织或RNA，云序生物为您完成从MeRIP富集，文库制备，上机测序到数据分析整套服务流程。

案例1：m5C RNA甲基化调控mRNA出核新机制 原文：5-methylcytosine promotes mRNA export — NSUN2 as the methyltransferase and ALYREF as an m5C reader 期刊：Cell Research 影响因子：15.60 中科院汪海林等研究团队揭示了m5C修饰在mRNA的分布图谱规律及其对调控mRNA出核作用新机制。研究人员建立了改进的RNA m5C单碱基分辨率高通量测序与生物信息分析技术，以此揭示mRNA m5C的分布规律，并绘制了精细的m5C修饰图谱，发现m5C在mRNA的翻译起始位点下游有明显富集，并且主要分布于CG富集区域。通过分析对比人和小鼠不同组织，发现m5C在mRNA上的分布特征在哺乳动物中十分保守，而在不同组织中修饰的基因具有特异性。研究团队同时发现，在小鼠睾丸发育过程中，动态的m5C修饰基因明显富集于精子发育相关功能，提示m5C修饰参与生殖发育调控。RNA m6A是真核生物丰富和调节遗传信息的一种保守的转录后机制。

原文：METTL4 catalyzes m6Am methylation in U2 snRNA to regulate pre-mRNA splicing 期刊：Necleic Acids Research 影响因子：16.48 新加坡南洋理工大学的研究人员通过人类全转录组 RNA 甲基化测序，在 Mettl4 敲除组与野生型对照组之间寻找出 m6Am 相对甲基化水平的差异位点，其中 U2 snRNA 的第 30 位 RNA 残基有明显的 m6Am 修饰水平差异。进一步的 FLAG-tag 融合蛋白实验证明，METTL4 蛋白直接催化了 U2 snRNA 上的 m6Am 甲基化修饰的发生。METTL4 过表达实验发现，其催化的 RNA 内部 m6Am 修饰位点具有 HMAGKD 的序列 motif 特征（H=A/C/U, M=A/C, K=G/U, D=A/G/U）。 在 Mettl4 敲除的人类细胞中，因为 U2 snRNA 无法完成 m6Am 修饰，故而对 snRNA 的 pre-mRNA 剪接功能产生了诸多影响。将m1A RNA甲基化特异性抗体与被随机打断的RNA的片段进行共孵育。6mADNA甲基化检测

种种研究迹象表明m6A 存在于很多物种中，占到了 RNA甲基化修饰的80%。m5C RNA甲基化分析

RNA m6A甲基化是RNA较关键的内部修饰之一，是真核生物丰富和调节遗传信息的一种保守的转录后机制。m6A修饰具有多种生物学功能，如调控mRNA翻译、转录以及稳定性等。目前，已在多种植物中发现这种RNA修饰，参与调控不同植物的各方面生物学功能。其中，拟南芥作为植物界中研究RNA甲基化修饰的先行者，许多学者将它作为研究对象，并与m6A甲基化测序技术结合，证实到RNA甲基化普遍存在于拟南芥各个发育期，并揭示了RNA甲基化相关酶在特殊发育时期，如开花，叶片形成，种子发育，根部生长等过程中发挥重要作用。m5C RNA甲基化分析