目前还没有一种完善的方法可以在单碱基分辨率下对每个转录本进行m6A的鉴定,这对评估m6A丰度是必要的。作者开发了一种新的方法,称为Nanom6A,用于在单碱基分辨率下鉴定和定量m6A修饰,使用基于XGBoost模型的纳米孔直接RNA测序。并使用MeRIP-Seq和m6A-REF-seq验证了此方法,证实了较高的准确性。利用这种方法,作者进行了毛果杨茎分化木质部中转录组范围的m6A修饰定量分析,揭示了不同的可变聚腺苷酸化(APA)量会导致不同的m6A修饰比例。m7G RNA甲基化修饰作为一类新型RNA甲基化。ac4C RNA乙酰化甲基化机制
云序优势 一站式服务 客户只需提供组织、细胞、体液样品或RNA,云序生物为您完成从ac4C RNA富集,文库制备,上机测序到数据分析整套服务流程。 抗体富集效率高 acRIP-seq的富集效率是决定数据质量的关键,云序生物acRIP-seq实验采用预验证的商业化抗体和精心优化的实验流程,具有极高的效率和特异性。 分子全覆盖 可检测mRNA、circRNA、LncRNA、pri-miRNA、rRNA、tRNA等多类RNA分子ac4C乙酰化位点。 严格的质控 云序生物对acRIP-seq实验每一步骤均设有关键质控,全程监控实验质量,保证客户得到数据。 专业的生物信息学分析 云序生物拥有专业的生物信息分析团队,帮助客户进行实验数据的挖掘。 RNA乙酰化测序与转录组联合应用 可整合RNA乙酰化数据和转录组数据进行生物信息学关联分析,揭示RNA乙酰化对基因表达调控的影响,深入挖掘RNA乙酰化的功能。 江苏小RNA甲基化采用类似ELISA抑 制竞争免疫的方法,实验样本和RNA甲基化标准品与RNA甲基化抗体共孵育。
云序生物对O8G RNA氧化化检测手段为O8G-IP-Seq技术,技术原理如下: 将O8G特异性抗体与被随机打断的RNA的片段进行共孵育,抓取有O8G修饰的片段进行测序;同时需要平行测序一个对照(Input)样本,对照样本只含有打断的RNA的片段,并不添加O8G特异性抗体与其共孵育。对照样本用于消除非特异性抓取的O8G片段的背景。对比免疫共沉淀(IP)样本和对照样本(Input)中的序列片段,将O8G氧化修饰位点定位到转录组上,并根据RNA-seq数据,计算样本中O8G氧化程度及对RNA表达水平的影响。
案例:mRNA中胞嘧啶核苷乙酰化促进其翻译效率 原文:Acetylation of Cytidine in mRNA Promotes Translation Efficiency 期刊:Cell 影响因子:36.22 美国ai症研究所(NCI)和弗雷德里克实验室,发现下调NAT10(RNA乙酰化酶)能够抑 制Hela细胞的行为;并且ac4C是由NTA10催化的mRNA修饰,下调NAT10后,ac4C的总体水平下降;为了进一步探究ac4C的功能,作者对WT和下调NAT10的Hela细胞进行acRIP-seq和mRNA测序,发现ac4C 的peak主要富集在mRNA的CDS区,同时下调NAT10能够降低ac4C在mRNA中的定点表达,并与靶mRNA的下调有很大关系;作者又进一步发现ac4C乙酰化修饰能够通过延长mRNA的半衰期并促进mRNA的稳定性,同时也能够通过ac4C peak中的密码子偏好性表达,决定并影响mRNA的解码效率,促进底物翻译。这些发现不仅扩大了mRNA修饰范围(包括乙酰化残基),也确立了ac4C在mRNA翻译调控中的作用。RNA甲基化普遍存在于拟南芥各个发育期。
在本研究中,作者对两个玉米(Zeamays)自交系转录组范围内的m6AmRNA分布和多聚体分析进行了平行分析,以评估m6A修饰与翻译状态的整体相关性。m6A位点普遍分布于数千个蛋白编码基因中,局限于一个共识基序内,主要富集于3’UTR区,且m6A修饰在调节替代聚腺苷酸位点的选择中发挥作用。更重要的是,m6A修饰根据其强度和基因位置显示了与翻译状态的多方面相关性。此外,在m6A修饰中观察到大量的种内变异,这种自然变异部分是由基因特异性表达和选择性剪接驱动的。总之,这些发现为鉴定玉米中受m6A修饰的转录本提供了宝贵的资源,并为更好地理解m6A在介导基因表达调控中的自然变异铺平了道路。核糖RNA在2’位置上发生甲基化的化学修饰。西藏pri-miRNA甲基化
将m1A RNA甲基化特异性抗体与被随机打断的RNA的片段进行共孵育。ac4C RNA乙酰化甲基化机制
研究表明,RNAm6A修饰影响mRNA的转录、定位、翻译、稳定性、剪接和核输出。然而,转录组m6A谱及其在白菜热胁迫中的潜在生物学作用尚缺乏足够的资料。通过MeRIP-seq获得白菜中RNA m6A修饰的first转录组全谱。同时,通过分析Input测序数据获得转录组数据。发现在正常组(CK)和热应激组(T43)中鉴定出11252个m6A共有峰和9729个含有m6A的共有基因。且CK组和T43组中,m6A峰均在3’UTR区高度富集。大约80%的基因有一个m6A位点。m6A峰的共识基序为AAACCV (V: U/A/G)。此外,关联分析发现m6A的甲基化程度与转录水平存在一定的相关性,说明m6A在基因表达中起一定的调控作用。植物中m6A修饰的研究主要集中在拟南芥的生长发育上。然而,拟南芥是一种盐敏感模式植物。因此,有必要对m6A修饰在高耐盐作物的盐胁迫响应中的作用进行研究。甜高粱是一种能源和饲料作物,非常适合在盐碱地生长。ac4C RNA乙酰化甲基化机制