ctDNA羟甲基化分析

m5C RNA是近年来发现的一类在tRNA及rRNA高丰度存在的甲基化修饰。利用高通量测序手段验证了非编码RNA以及部分mRNA中m5C存在，但是在不同物种、不同组织中m5C修饰分布图谱尚没有系统性报道。云序生物率先开展m5C RNA甲基化测序服务，采用经典重亚硫 酸盐处理的方式进行测序。在全转录范围内及tRNA水平查看基因m5C甲基化修饰水平。 通过高通量测序和生物信息分析，识别甲基化富集的基因组区域。 富集峰识别后，得到的是一堆基因组位置信息，通过生物信息分析利用邻近基因对富集峰进行注释，并根据峰中点相对于已知基因的位置，将富集峰为启动子峰、上游峰、内含子峰、外显子峰、基因间峰。 m6A修饰在各种真核生物、各类组织细胞中普遍存在。ctDNA羟甲基化分析

m6A甲基化已经被证明与植物对病原体的抗性有关。然而，小麦(Triticum aestivum) 全转录组m6A谱及其在小麦抗小麦黄花叶病毒(WYMV)中的潜在生物学功能尚未见报道。这项研究是shou次鉴定两个不同抗WYMV小麦品种的转录组m6A修饰谱。通过对m6A-MeRIP-seq数据的分析，作者在WYMV感ran的抗病小麦品种(WRV)和WYMV感ran的敏感小麦品种(WSV)中鉴定出25752个共有m6A峰和30582个共有m6A基因，这些峰主要富集在编码序列3‘UTR区和终止密码子中。GO分析和RNA测序数据显示，m6A和mRNA水平均发生明显变化的基因与植物防御反应有关。天津环状DNA甲基化2’-O-RNA甲基化是一种受RNA甲基化酶或纤维蛋白酶作用下。

植物m6A表观转录组修饰的生物学功能尚不完全清楚。CPSF30-L是聚腺苷酸化因子CPSF30的主要亚型，由CPSF30-S和一个m6A结合的YTH结构域组成。CPSF30-L的生物学作用及其在选择性聚腺苷酸化中结合m6A功能的分子机制尚不清楚。在这里，作者揭示了CPSF30-L是拟南芥m6A的“reader”，其m6A结合功能是花卉的转型和脱落酸(ABA)响应所必需的。此外，CPSF30-L的m6A结合活性增强了液体样核体的形成，其中CPSF30-L主要识别m6A修饰的远上游元件，调控聚腺苷酸化位点的选择。

在本研究中，作者对两个玉米(Zeamays)自交系转录组范围内的m6AmRNA分布和多聚体分析进行了平行分析，以评估m6A修饰与翻译状态的整体相关性。m6A位点普遍分布于数千个蛋白编码基因中，局限于一个共识基序内，主要富集于3’UTR区，且m6A修饰在调节替代聚腺苷酸位点的选择中发挥作用。更重要的是，m6A修饰根据其强度和基因位置显示了与翻译状态的多方面相关性。此外，在m6A修饰中观察到大量的种内变异，这种自然变异部分是由基因特异性表达和选择性剪接驱动的。总之，这些发现为鉴定玉米中受m6A修饰的转录本提供了宝贵的资源，并为更好地理解m6A在介导基因表达调控中的自然变异铺平了道路。云序生物率先开展m5C RNA甲基化测序服务，采用经典重亚硫 酸盐处理的方式进行测序。

样本要求 1）样品类型：细胞、新鲜组织或RNA 样品。 2）样品量： 细胞：2×107 组织：500 mg-1 g RNA：30 - 300 μg，浓度不低于100 ng/μL 3）RNA 质量要求： OD260/280：1.8~2.1 浓度≥ 100 ng/μl RNA 无明显降解（28S:18S ≥ 1.5 或者RIN ≥ 7） 4）样品保存： 新鲜组织可用RNA保护剂处理或液氮冻存后，-80℃保存。 细胞样品，离心收集细胞沉淀后用PBS洗2遍，直接-80℃保存；RNA 样品可溶于乙醇或RNA-free 的超纯水中，-80℃保存。样品保存 Note:样品保存期间避免反复冻融。 5）样品运输：样品置于1.5 ml Eppendorf管或冻存管中，封口膜封好，装在塑料袋中，干冰运输。对m6A RNA甲基化，目前较流行的检测手段为m6A-Seq技术。dna甲基化检测公司

对m6A RNA甲基化，目前流行的检测手段为m6A-Seq技术，适用于m6A RNA甲基化谱研究。ctDNA羟甲基化分析

案例3：拟南芥m5C RNA甲基化谱及TRM4B酶对根的影响 原文：Transcriptome-Wide Mapping of RNA 5-Methylcytosine in Arabidopsis mRNAs and Noncoding RNAs 期刊：The Plant Cell 影响因子：8.23 与上篇不同，本研究团队采用m5C RNA甲基化测序研究拟南芥中m5C甲基化谱，在种子，幼芽，根中发现了1000多个特异性的位点。敲低RNA m5C甲基转移酶TRM4B，造成tRNA稳定性的降低。研究人员还证实TRM4B突变体的初级根比野生型更短，同时对氧化的应激反应更敏感。ctDNA羟甲基化分析