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案例2：cancer基因与邻近增强子的环化共扩增 原文：Morton AR, Dogan-Artun N, Faber ZJ, et al. Functional enhancers shape extrachromosomal oncogene amplifications. Cell. 2019 Nov 27;179(6):1330-1341 期刊：Cell 影响因子：36.22 本文作者利用染色体外环状DNA测序探讨了cancer基因及其邻近增强子通过环状染色体外DNA的形式进行扩增事件，研究过程中发现了EGFR基因在成胶质细胞瘤中存在与其上游约130kb的非编码序列共同扩增的特征，EGFR基因案例表明tumour细胞中的cancer基因通过高级扩增与环化而形成的对自身调控活性的增强，是一个十分有效的促cancer机制。总之，这项研究综合利用各项计算分析和实验手段，率先揭示了增强子在cancer基因环化扩增介导的促cancer效应中所发挥的重要作用，这一机制也为抗tumour和诊断提供新的方向和理论依据。云序生物对O8G RNA氧化化检测手段为O8G-IP-Seq技术。平台测序文章

m6A 修饰就是真核生物 mRNA 中较常见存在的一种修饰形式，得到了常见的关注和研究。除此之外，还存在着一种分子结构上非常相似的 RNA 修饰形式：m6Am——在 m6A 修饰的基础上，同一个腺苷酸残基的核糖的 2’ 羟基也被甲基化，产生 2’ 甲氧基结构（2’-O-CH3）。与 m6A 的常见分布所不同的是，m6Am 修饰的分布主要局限于 mRNA 5’ 帽子结构下游的较早核苷酸残基上发生。该位点的 m6Am 修饰在进化上高度保守，无论是在斑马鱼、小鼠还是人类细胞中均有发现。遗传测序microRNA甲基化环状DNA是从染色体上断裂、环化或者额外复制产生的序列。

m6A环状RNA测序:近年来，科学家们发现了一种可逆的RNA甲基化—m6A，即RNA分子腺嘌呤第6位氮原子上的甲基化修饰（N6-methyladenosine，m6A）。研究发现，m6A是真核生物mRNA上常见的一种转录后修饰， m6A在细胞加速mRNA代谢和翻译，在细胞分化、胚胎发育和压力应答等过程中起重要作用。 目前对m6A RNA流行检测手段为MeRIP-Seq技术，云序生物提供成熟m6A RNA甲基化MeRIP-seq服务，技术原理如下： 将甲基化RNA特异性抗体与被随机打断的RNA的片段进行共孵育，抓取有甲基化修饰的片段进行测序。

案例1：全外显子测序在ai症研究中的应用 胰腺导管腺ai(PDA)的预后非常差，因此对其病原学的研究以及靶向干预医治非常必要。本文对109个显微切割的PDA组织样品进行了全外显子测序。研究表明：环境压力以及DNA修复基因的改变与不同的突变谱有关联。许多ai基因/抑ai基因位点发生了拷贝数变化，但只有MYC基因拷贝数扩增与比较差的预后以及腺鳞ai亚型相关。此外，作者还在PDA中发现了多个新的突变基因，其中一些与预后相关。RBM10突变往往预示着较长的生存期。90%以上的样品中发生了KRAS的突变，但只有密码子Q61的等位突变与较长的生存期相关。此外，Wnt信号通路，染色质重塑信号通路，Hedgehog信号通路，DNA修复和细胞周期相关的基因也被发现有较高的突变频率。这些数据表明了不同PDA样品的基因组多样性，并且找到了一些与预后相关的基因以及医治靶点。云序生物为您完成m5C RNA-Seq全套实验服务。

环状DNA形成的机理 目前研究表明，环状DNA是从染色体上断裂、环化或者额外复制产生的序列，其剪切加工机理主要提出有两种可能：（1）通过染色体异位同源重组环化（intrachromatid ectopic homologous recombination，HR）；（2）通过非同源染色体末端连接环化（nonhomologous end-joining，NHEJ）。环状DNA形成是一个复杂的过程，更多环化方式有待探索。针对血清血浆微量样品，云序生物参考卢煜明教授团队开发的方法，酶切去除线性DNA后，利用Tn5转座酶，打开环状DNA环状结构并同时在DNA的片段两端加上接头，进行建库及测序。云序生物为您完成m5C RNA-Seq全套实验服务，数据准确。江西分析测序

云序生物拥有强大的生信分析团队，可以为客户提供个性化要求。平台测序文章

比色法检测整体甲基化水平实验原理 比色法RNA甲基化定量检测试剂盒提供了定量检测总RNA甲基化水平的试剂。采用类似ELISA抑 制竞争免疫的方法，实验样本和RNA甲基化标准品与RNA甲基化抗体共孵育；然后转移到包被有RNA甲基化多核苷酸的条孔上。在孵育之后孔可以洗脱任何未包被的试剂然后添加检测抗体生成信号，通过微孔板读取仪（例：酶标仪）来检测。因为在样本的RNA甲基化抑 制了RNA甲基化抗体与涂抹在孔上RNA甲基化的结合，样本中更高浓度导致与在孔中的RNA甲基化结合减少。因此，从孔中测得信号或OD参数与样本中RNA甲基化的数量成反比。并且样本中RNA甲基化的量可以通过预先设定的RNA甲基化标准品来实现定量检测。平台测序文章