外泌体甲基化差异分析

RNA 修饰在基因表达调控中扮演着非常重要的角色。m6A 修饰就是真核生物 mRNA 中较常见存在的一种修饰形式，得到了常见的关注和研究。除此之外，还存在着一种分子结构上非常相似的 RNA 修饰形式：m6Am——在 m6A 修饰的基础上，同一个腺苷酸残基的核糖的 2’ 羟基也被甲基化，产生 2’ 甲氧基结构（2’-O-CH3）。与 m6A 的常见分布所不同的是，m6Am 修饰的分布主要局限于 mRNA 5’ 帽子结构下游的较早核苷酸残基上发生。该位点的 m6Am 修饰在进化上高度保守，无论是在斑马鱼、小鼠还是人类细胞中均有发现。2’-O-RNA甲基化修饰在mRNA、tRNA、rRNA、miRNA等分子上分布。外泌体甲基化差异分析

云序特色 √ j较全产品线：可针对性地检测不同类型RNA分子的O8G氧化； √ 特异性高：特异性富集和检测O8G氧化的 RNA的片段； √ 全转录组覆盖：全转录组范围的RNA O8G氧化检测； √ 全物种检测：可以检测几乎任何动植物的O8G氧化； √ 专业化的生信分析：强大的生信团队，专业的O8G氧化数据分析； 产品分类 O8G 全转录组测序：同时检测O8G氧化的环状RNA，LncRNA和mRNA； O8G 环状RNA测序：检测O8G氧化的所有环状RNA； O8G LnRNA测序：同时检测O8G氧化的LncRNA和mRNA； O8G mRNA测序：检测O8G氧化的所有mRNA；四川甲基化研究RNA去甲基化可以提高水稻和马铃薯植株的产量和生物量。

案例3：m6A RNA去甲基化酶ALKBH5通过结合lncRNA促进胶质瘤细胞 期刊：Cancer Cell 影响因子：27.43 近年来，m6A RNA修饰的研究已成为当今生命科学领域前沿研究之一，不断有高影响分子文章问世。m6A RNA修饰的催化、去除以及识别的分子机理研究越来越清晰，此时人们更关心m6A RNA修饰与重大疾病之间的相关性。近期Cancer Cell报道了m6A RNA去甲基化酶ALKBH5在神经胶质瘤中具有生理作用。在本研究中，去甲基化酶ALKBH5在恶性胶质瘤干性样细胞表达上调，而ALKBH5高表达的胶质细胞瘤患者预后生存率更差。通过敲低ALKBH5，meRIP鉴定m6A RNA甲基化修饰模式，基因芯片检测差异表达>2倍的基因，终筛选到与细胞周期调控相关的FOXM1基因，其在GSCs的自我修复和tumsour形成中起到关键作用。

样本要求 1）样品类型：细胞、新鲜组织或RNA 样品。 2）样品量： 细胞：2×107 组织：500 mg-1 g RNA：30 - 300 μg，浓度不低于100 ng/μL 3）RNA 质量要求： OD260/280：1.8~2.1 浓度≥ 100 ng/μl RNA 无明显降解（28S:18S ≥ 1.5 或者RIN ≥ 7） 4）样品保存： 新鲜组织可用RNA保护剂处理或液氮冻存后，-80℃保存。 细胞样品，离心收集细胞沉淀后用PBS洗2遍，直接-80℃保存；RNA 样品可溶于乙醇或RNA-free 的超纯水中，-80℃保存。样品保存 Note:样品保存期间避免反复冻融。 5）样品运输：样品置于1.5 ml Eppendorf管或冻存管中，封口膜封好，装在塑料袋中，干冰运输。ctDNA 的 5mC 甲基化修饰研究仍然是一个未被充分探索的领域。

案例2: m5C RNA甲基化基因组分布图谱 原文：Distinct 5-methylcytosine profiles in poly(A) RNA from mouse embryonic stem cells and brain 期刊：Genome Biology 影响因子：13.21 近期刊登了解析RNA m5C在不同组织细胞的分布图谱相关文章。研究人员选取小鼠胚胎干细胞（ESC）和脑组织（n=3）作为实验样本，利用m5C RNA甲基化测序技术对两组样本中的总RNA和胞核RNA进行检测。结果表明，ESC中总RNA 5mC的分布频率比脑组织的分布频率更高。研究人员将m5C位点和不同的基因组区域（CDS, 5’-UTR, 3’-UTR等）进行了关联分析。结果表明，总RNA中m5C位点更倾向于分布在转录起始位点。脑组织和ESC中，3’-UTR区m5C的分布区别很大，这暗示着3’-UTR区的RNA m5C修饰可能与细胞功能和细胞类型密切相关。采用类似ELISA抑 制竞争免疫的方法，实验样本和RNA甲基化标准品与RNA甲基化抗体共孵育。青海甲基化研究

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研究还发现，m6Am 修饰是一个可逆的动态修饰，当细胞遭遇热激、低氧等应激性刺激时 m6Am 水平上升，说明 m6Am 可能在细胞应激反应中扮演了重要角色。近来也有研究发现，除了 mRNA 的较早编码核苷酸残基以外，在 snRNA 内部也有 m6Am 甲基化修饰的分布。虽然 m6Am 修饰早在 1975 年就已经被人类发现，但由于检验手段的匮乏，科学家难以区分出 m6A 修饰与 m6A 修饰，因此直到近年来 m6Am 测序技术逐渐发展成熟，才为进一步深入研究 m6Am 这一重要的 RNA 修饰铺平了道路。外泌体甲基化差异分析