河南甲基化利器

样本要求 1）样品类型：细胞、新鲜组织或RNA 样品。 2）样品量： 细胞：2×107 组织：500 mg-1 g RNA：30 - 300 μg，浓度不低于100 ng/μL 3）RNA 质量要求： OD260/280：1.8~2.1 浓度≥ 100 ng/μl RNA 无明显降解（28S:18S ≥ 1.5 或者RIN ≥ 7） 4）样品保存： 新鲜组织可用RNA保护剂处理或液氮冻存后，-80℃保存。 细胞样品，离心收集细胞沉淀后用PBS洗2遍，直接-80℃保存；RNA 样品可溶于乙醇或RNA-free 的超纯水中，-80℃保存。样品保存 Note:样品保存期间避免反复冻融。 5）样品运输：样品置于1.5 ml Eppendorf管或冻存管中，封口膜封好，装在塑料袋中，干冰运输。将甲基化RNA特异性抗体与被随机打断的RNA的片段进行共孵育。河南甲基化利器

研究表明，RNAm6A修饰影响mRNA的转录、定位、翻译、稳定性、剪接和核输出。然而，转录组m6A谱及其在白菜热胁迫中的潜在生物学作用尚缺乏足够的资料。通过MeRIP-seq获得白菜中RNA m6A修饰的first转录组全谱。同时，通过分析Input测序数据获得转录组数据。发现在正常组(CK)和热应激组(T43)中鉴定出11252个m6A共有峰和9729个含有m6A的共有基因。且CK组和T43组中，m6A峰均在3’UTR区高度富集。大约80%的基因有一个m6A位点。m6A峰的共识基序为AAACCV (V: U/A/G)。此外，关联分析发现m6A的甲基化程度与转录水平存在一定的相关性，说明m6A在基因表达中起一定的调控作用。植物中m6A修饰的研究主要集中在拟南芥的生长发育上。然而，拟南芥是一种盐敏感模式植物。因此，有必要对m6A修饰在高耐盐作物的盐胁迫响应中的作用进行研究。甜高粱是一种能源和饲料作物，非常适合在盐碱地生长。dna甲基化过程ctDNA 的 5mC 甲基化修饰研究仍然是一个未被充分探索的领域。

研究表明，RNAm6A修饰影响mRNA的转录、定位、翻译、稳定性、剪接和核输出。然而，转录组m6A谱及其在白菜热胁迫中的潜在生物学作用尚缺乏足够的资料。通过MeRIP-seq获得白菜中RNA m6A修饰的first转录组全谱。同时，通过分析Input测序数据获得转录组数据。发现在正常组(CK)和热应激组(T43)中鉴定出11252个m6A共有峰和9729个含有m6A的共有基因。且CK组和T43组中，m6A峰均在3’UTR区高度富集。大约80%的基因有一个m6A位点。m6A峰的共识基序为AAACCV (V: U/A/G)。此外，关联分析发现m6A的甲基化程度与转录水平存在一定的相关性，说明m6A在基因表达中起一定的调控作用。

m6A修饰在植物中是必不可少的。在这里，作者证明了在水稻中表达转基因人RNA去甲基化酶FTO可以使温室条件下的粮食产量增加3倍以上。在田间试验中，转基因FTO在水稻和马铃薯中的表达使产量和生物量增加了约50%。此外，FTO的存在促进了根分生组织细胞增殖和分蘖芽的形成，提高了光合效率和抗旱性，但对成熟细胞大小、茎分生组织细胞增殖、根直径、株高或倍性没有影响。FTO介导了植物RNA中大量的m6A去甲基化(在poly(A) RNA中约7%的去甲基化，在非核糖体核RNA中m6A下降约35%)，诱导染色质开放和转录激huo。因此，调控植物RNA m6A甲基化是一种很有前景的策略，可明显提高植物的生长和作物产量。对m6A RNA甲基化，目前较流行的检测手段为m6A-Seq技术。

在本研究中，作者对两个玉米(Zeamays)自交系转录组范围内的m6AmRNA分布和多聚体分析进行了平行分析，以评估m6A修饰与翻译状态的整体相关性。m6A位点普遍分布于数千个蛋白编码基因中，局限于一个共识基序内，主要富集于3’UTR区，且m6A修饰在调节替代聚腺苷酸位点的选择中发挥作用。更重要的是，m6A修饰根据其强度和基因位置显示了与翻译状态的多方面相关性。此外，在m6A修饰中观察到大量的种内变异，这种自然变异部分是由基因特异性表达和选择性剪接驱动的。总之，这些发现为鉴定玉米中受m6A修饰的转录本提供了宝贵的资源，并为更好地理解m6A在介导基因表达调控中的自然变异铺平了道路。m6A修饰在各种真核生物、各类组织细胞中普遍存在。河北甲基化表达

采用类似ELISA抑 制竞争免疫的方法，实验样本和RNA甲基化标准品与RNA甲基化抗体共孵育。河南甲基化利器

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