样本要求 样品类型 细胞、组织或RNA,其他样本类型请电询。 样品量 a) 细胞:1×108 b) 组织:500 mg - 5g c) RNA:100 μg - 300 μg (OD260/280:1.6-2.3; RNA无明显降解) 样品运输及保存 样品运输:样品置于1.5mL离心管中,封口膜封好,干冰运输。 样品保存:细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理,液氮冻存后-80℃保存;RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中,-80℃保存,避免反复冻融。目前,环状DNA不只可以作为一种新型特异的tumour标志物,还在tumour发生和发展机理研究中发挥着重大的潜在价值。m7G MeRIP测序方式,采用预验证的商业化抗体和精心优化的实验流程。中国台湾服务测序RNA甲基化
外显子组测序利用序列富集技术特异性的检测基因组中的外显子区域(编码蛋白的DNA区域),能够直接发现与蛋白质功能变异相关的遗传突变。与全基因组重测序相比,外显子组测序只针对外显子区域,性价比极高,更适用于大样本量疾病及ai症样本分析。外显子捕获试剂盒: 云序生物采用Agilent外显子捕获试剂盒,不仅能检测全部外显子区域,还能检测与蛋白功能密切相关的UTR区域 专业化的生物信息分析: 云序生物具有强大的生物信息学团队,能够满足客户的各类深入数据分析要求广西测序分析云序生物采用商业化RIP试剂盒,保证了RIP实验的成功率和稳定性。
案例1:m5C RNA甲基化调控mRNA出核新机制 原文:5-methylcytosine promotes mRNA export — NSUN2 as the methyltransferase and ALYREF as an m5C reader 期刊:Cell Research 影响因子:15.60 中科院汪海林等研究团队揭示了m5C修饰在mRNA的分布图谱规律及其对调控mRNA出核作用新机制。研究人员建立了改进的RNA m5C单碱基分辨率高通量测序与生物信息分析技术,以此揭示mRNA m5C的分布规律,并绘制了精细的m5C修饰图谱,发现m5C在mRNA的翻译起始位点下游有明显富集,并且主要分布于CG富集区域。通过分析对比人和小鼠不同组织,发现m5C在mRNA上的分布特征在哺乳动物中十分保守,而在不同组织中修饰的基因具有特异性。研究团队同时发现,在小鼠睾丸发育过程中,动态的m5C修饰基因明显富集于精子发育相关功能,提示m5C修饰参与生殖发育调控。
m6A环状RNA测序:近年来,科学家们发现了一种可逆的RNA甲基化—m6A,即RNA分子腺嘌呤第6位氮原子上的甲基化修饰(N6-methyladenosine,m6A)。研究发现,m6A是真核生物mRNA上常见的一种转录后修饰, m6A在细胞加速mRNA代谢和翻译,在细胞分化、胚胎发育和压力应答等过程中起重要作用。 目前对m6A RNA流行检测手段为MeRIP-Seq技术,云序生物提供成熟m6A RNA甲基化MeRIP-seq服务,技术原理如下: 将甲基化RNA特异性抗体与被随机打断的RNA的片段进行共孵育,抓取有甲基化修饰的片段进行测序。云序拥有专业的生物信息学团队,开发了高效识别分析环状DNA的算法。
案例1:孕妇血浆中胎儿环状DNA 的特征是:呈甲基化状态 原文:Characteristics of Fetal Extrachromosomal Circular DNA in Maternal Plasma: Methylation Status and Clearance 期刊:Clinical Chemistry 影响因子:8.322 近期,NIPT之父卢煜明教授团队开发了一种环状DNA 甲基化分析的测序方案,通过对不同产后时间点的胎儿环状DNA含量的评估,研究了胎儿环状DNA的体外clear效率。作者还发现血浆中的胎儿 环状DNA 与母体 环状DNA 相比甲基化程度相对较低。此外,和胎儿线性DNA类似,胎儿环状DNA在分娩后从母血中迅速clear。总之,该团队基于转座酶和m5C位点酶学转化方法开发出了环状DNA甲基化测序技术,并揭示了孕妇血浆中的胎儿环状DNA甲基化状况,为环状DNA的深入研究及新型分子标志物的开发提供了新的技术手段。云序生物专注做测序服务,PCR,质谱检测。研究测序研究
在RIP-Seq中,富集峰表示全部活跃转录的区域(相对于对照IgG)。中国台湾服务测序RNA甲基化
LC-MS/MS检测核酸修饰水平实验原理: 云序生物建立了一种基于 LC-MS/MS 平台的核酸修饰分析方法,定量 4类 DNA 修饰(5-mdC、5-hmdC、5-fodC、6-mdA)和 9 类 RNA 修饰(m5C、 m6A、Am、Gm、Cm、Um、m1A、m7G、ac4C),为表观遗传研究提供理想的技术平台。 液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)能够很好的检测到极性高、稳定性差的化合物,并能够对物质进行精确的定量。LC-MS/MS 法是目前所有总体甲基化水平分析方法中能够对含量极低的修饰碱基进行准确定性定量的方法;而将 LCMS/MS 法与一定的样品前处理方法相结合,能够更好地对各类生物样品中的 DNA/RNA 修饰进行检测。中国台湾服务测序RNA甲基化