案例:hMeDIP-seq揭示了心机细胞发育与肥大过程中的基因表达与5hmC有关 DNA hydroxymethylation controls cardiomyocyte gene expression in development and hypertrophy[J].Greco C M, Kunderfranco P, Rubino M, et al . Nature Communications, 2016, 7:12418. 5-hmC(DNA羟甲基化)在基因体上富集能够激huo基因的转录调控,但对启动子和远端调节区的功能不太清楚。本文主要是以不同发育时间点和心肌肥大的心肌细胞为实验载体,主要剖析5-hmC在心肌细胞(CMC)基因组中的分布,并揭示了5-hmC在心脏发育和疾病中的作用机制。1)通过DNA羟甲基化测序,作者发现在心脏发育过程中,CMCs中的5-hmC在基因间区域逐渐减少,并向GB上富集(图1)。2)通过DNA羟甲基化和转录组关联分析,作者得出5-hmC是CMCs发育和肥大过程中的重要调控因子(图2)。该技术可以同时检测环状DNA和环状DNA的甲基化修饰状态。新疆服务表观遗传组测序分析
乳腺ai转移确诊后,患者已经很少能够彻底痊愈。但是现在,我们可以利用含有tumsor染色体异质性的ctDNA来对乳腺ai进行检测。在H Saal教授的研究中,他们对20例早期确诊的原发性乳腺ai患者进行了监测和长期随访。通过NGS和液体数字PCR联合使用的方法,他们能够覆盖很多低信号的全基因组测序结果,并且first发现,在手术后,ctDNA监测是高度精确的,其成功监测预示了93%的复发病人以及100%的没有复发的病人。基于ctDNA的监测中,转移患者的平均生存期是11个月,而在患者的长期不进展期的时候,是没有检测到ctDNA的。因此,ctDNA能够预测不良生存期。这些发现表明,我们可以利用ctDNA来监测早期乳腺ai患者的转移情况,并帮助修改治疗方案,避免过度医治。四川云序表观遗传组测序介绍这种形式的DNA被称为环状DNA (extrachromosomal circular DNA)。
早在十九世纪后期,科学家就通过显微镜观察到了蛋白质与 DNA 直接的相互作用,从那以后,他们开始深入探索蛋白质结合并控制 DNA 的作用机制。为了研究 DPI,科学家发明了很多方法:凝胶阻滞、DNaseI 足迹实验、甲基化干扰、体内足迹、酵母单杂、ChIP-Seq 等。其中 ChIP-Seq 因其能真实、完整地反映结合在 DNA 序列上的靶蛋白,是目前全基因组水平研究 DPI 的标准实验技术。 ChIP-Seq 的基本过程包括甲醛交联将细胞内与 DNA 结合的蛋白固定,再裂解细胞,超声断裂 DNA,将 DNA-蛋白质复合物结合在特异性抗体上,再用可以结合抗体的 ProteinA 磁珠将抗体-蛋白-DNA 复合物抓取下来,之后将 DNA 与蛋白解离,将 DNA的片段补平,加 A,加接头,进行高通量测序。
云序生物为您带来一种基于酶学方法的 DNA 甲基化测序技术 EM-seq(Enzymatic Methyl-seq),该方法结合使用多种酶,在保证 5mC 和 5hmC 在 Illumina 测序中仍被识别为 C 的前提条件下,将未发生修饰的胞嘧啶(C)转化为尿嘧啶(U),并在后续的扩增和测序过程中被识别为胸腺嘧啶(T)。EM-seq 有效弥补了 Bis-Seq 需要极端反应条件的缺陷,可以普遍应用于包含 ctDNA 在内的微量脆弱 DNA 样品。同时,EM-seq 得到的测序结果与 WGBS 得到的转化序列相同,因此可以使用相同的数据分析流程。运用 EM-seq 技术,需低至 10 ng 的 DNA 样品便可进行单碱基精度的全基因组 5mC 修饰测序。可用于协助评估用药疗效、复发及医治后期转移动态的监测。
早在去年 5 月,中国本土公司近岸蛋白质(NOVOPROTEIN)便公开了该方法替代 ChIP-Seq 的可能性与原料 ChiTagTM 酶(一种 Protein A 与 Tn5 融合蛋白)的技术原理(图1),展示了中国生物技术公司已经走出对国外公司的简单模仿,在某些领域的自主创新走在了世界的前列。Henikoff 博士的文章进一步展示了 ChiTag (Chromatin Immuno-Tagment) 酶在解决蛋白质-DNA 相互作用的巨大潜力。云序生物提供的MeDIP测序服务,将甲基化DNA免疫共沉淀技术(MeDIP)和高通量测序相结合,能够帮助客户快速地获取全基因组范围内的DNA甲基化图谱,并比较不同样品中的甲基化分布差异。云序生物提供的MeDIP测序服务,将甲基化DNA免疫共沉淀技术(MeDIP)和高通量测序相结合,能够帮助客户快速地获取全基因组范围内的DNA甲基化图谱,并比较不同样品中的甲基化分布差异。云序生物强大生物信息团队,满足客户个性化数据分析要求。贵州云序生物表观遗传组测序案例
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案例2:良性和恶性外周神经鞘膜瘤的比较甲基化组分析 Feber, A., G. A. Wilson, et al. "Comparative methylome analysis of benign and malignant peripheral nerve sheath tumors." Genome Res 21(4): 515-24. MeDIP测序可以对基因组中的甲基化区进行无偏差的分析,而不只局限于基因启动子和CpG岛。本文通过MeDIP测序对恶性外周神经鞘膜瘤、良性神经纤维瘤和正常雪旺细胞中的甲基化组进行了比较分析,找到了101,466个ai症特异性差异甲基化区(cDMRs)。数据表明:这些cDMRs在两类卫星重复序列(SATR1 和ARL a)中明显富集;此外,高甲基化cDMRs在CpG岛岸、非CpG岛相关启动子中明显富集,而低甲基化cDMRs在SINE重复序列中明显富集。通过与基因表达数据的联合分析发现:与CpG岛岸cDMRs相关的基因的表达模式可以区分疾病表型。新疆服务表观遗传组测序分析