CUT&Tag技术研究蛋白质-DNA互作的优势 原文:CUT&Tag for efficient epigenomic profiling of small samples and single cells 期刊:Nature Communications 发表时间:20190429 影响因子: 11.878 在生物学研究中,DNA与蛋白质之间的互作是至关重要的,参与基因的表达、调控、复制、重组和修复以及RNA的转运、翻译和调控等多个过程,几乎涉及所有的生命活动。目前研究两者互作的方法很多,作者选择了传统的研究手段ChIP-seq,优化的CUT&RUN方法,以及新方法CUT&Tag共同研究组蛋白H3K27me3。通过比对实验结果,发现CUT&Tag有低的背景噪声以及强的信号。通过对H3K4me1修饰物进行分析,显示CUT&Tag的灵敏度高,实验可重复性好。ctDNA甲基化基因的有效性(AUC:0.816)远高于传统分子标志物AFP(AUC:0.969)。黑龙江云序表观遗传组测序结果
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ChIP-Seq(Chromatin Immunoprecipitation Sequencing)因能真实、完整地反映靶蛋白与DNA序列的结合情况,因而成为研究DNA-蛋白相互作用的经典方法。但ChIP-Seq继承了ChIP的难点与局限性:需要大量细胞投入(106-107),甲醛交联易导致假阳性或假阴性,对染色质的完整性、免疫沉淀抗体的特异性较为敏感,整体实验步骤复杂耗时长,测序数据背景信号高等,这些难点使得低投入量、低丰度的靶蛋白、弱结合DNA-蛋白质的研究变得较为困难。
案例2. ATAC-seq与ChIP-seq联合分析 原文:Nfib Promotes Metastasis through a Widespread Increase in Chromatin Accessibility 期刊:Cell 影响因子:31.398 该文章是通过比较原发性和肝转移性的小细胞肺ai细胞之间的差异,从而研究人小细胞肺ai促进ai症扩散转移的背景机制。首先利用ATAC-seq,发现NFI家族转录因子富集在具有差异的染色质开放位点中,预示着NFI家族转录因子在调控tumsor细胞转移中扮演着重要角色。进一步进行ChIP-seq,通过2种测序结果联合分析,发现在染色质高开放性位点区域伴随着Nfib拷贝数量增多,且Nfib在侵袭性原发性tumsor和转移性tumsor内高表达,Nfib表现出维持染色质及远端调控区域开放和促进神经基因表达的功能,说明Nfib对促进ai细胞增殖和迁移具有重要的作用。后续进行文库构建与高通量测序,从而获得发生甲基化修饰的环状DNA。
ctDNA/cfDNA 之所以引起学界这么大的研究热情,与其在临床上广阔的应用前景是分不开的。相比于目前tumsor诊断当中普遍使用的组织活检,ctDNA 测序对患者的伤害小,且可以多次、实时地进行提取检测,在临床运用上具有极大的优势,有助于ai症的早发现、早医治,被誉为“液体切片活检”。ctDNA 的甲基化检测,同时结合了 ctDNA 测序于 DNA 甲基化测序的优势,在ai症检测方面提供更好的特异性和灵敏度。在 2021 年,已有 ctDNA/cfDNA 甲基化测序相关的商业化产品面市专业的生物信息学团队,开发了高效识别分析环状DNA的算法。浙江技术表观遗传组测序平台
作者还发现血浆中的胎儿 环状DNA 与母体 环状DNA 相比甲基化程度相对较低。黑龙江云序表观遗传组测序结果
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