案例1:ctDNA羟甲基化可作为人类ai症诊断的分子标志物 期刊:Cell Research 影响因子:15 本篇文章的作者是复旦大学华山医院的刘杰教授课题组与芝加哥大学何川教授课题组合作通过检测不同ai症样本中ctDNA羟甲基化分布和水平。本文通过ctDNA羟甲基化检测技术,在全基因组范围内,检测ai症与健康人中ctDNA羟甲基化的水平。检测的ai症类型包括肠ai,胃ai,胰腺ai,肝ai,甲状腺ai,检测组织类型包括ai症及ai旁组织,血浆和白血球。结果发现,5hmC主要分布在基因组的转录活性区,可能与开放染色质和允许组蛋白修饰相关。同时,5hmC对特定ai症类型高敏感,如肠ai和胃ai。总的来说,ctDNA羟甲基化检测为日后通过血浆样本进行无创诊断奠定了良好的基础。cfDNA是人体组织排放到血液、尿液或脑脊液等循环体系中的降解的DNA小片段。浙江项目表观遗传组测序分析
ATAC测序的全称是Assay for Transposase Accessible Chromatin using sequencing,运用测序手段研究转座酶可接近的染色质的一种技术。该技术通过转座酶对某种特定时空下开放的核染色质区域进行切割,进而获得在该特定时空下基因组中活跃转录的调控序列。这项技术只需少量细胞便可获得实时全基因组活性调控序列信息,应用于转录因子结合分析、核小体定位、活性调控元件分布等研究,在表观遗传机制研究领域有广阔的应用前景。 云序生物对染色质开放区域进行研究的技术是利用ATAC测序技术,其原理为:利用DNA转座酶可以携带DNA去识别染色质开放区域。人为地将携带已知DNA序列标签的转座复合物(即带着测序标签的转座酶),加入到细胞核中,再利用已知序列的标签进行建库后测序,从而识别染色质的开放区域。福建项目表观遗传组测序研究该团队基于转座酶和m5C位点酶学转化方法开发出了环状DNA甲基化测序技术。
案例2. ATAC-seq与ChIP-seq联合分析 原文:Nfib Promotes Metastasis through a Widespread Increase in Chromatin Accessibility 期刊:Cell 影响因子:31.398 该文章是通过比较原发性和肝转移性的小细胞肺ai细胞之间的差异,从而研究人小细胞肺ai促进ai症扩散转移的背景机制。首先利用ATAC-seq,发现NFI家族转录因子富集在具有差异的染色质开放位点中,预示着NFI家族转录因子在调控tumsor细胞转移中扮演着重要角色。进一步进行ChIP-seq,通过2种测序结果联合分析,发现在染色质高开放性位点区域伴随着Nfib拷贝数量增多,且Nfib在侵袭性原发性tumsor和转移性tumsor内高表达,Nfib表现出维持染色质及远端调控区域开放和促进神经基因表达的功能,说明Nfib对促进ai细胞增殖和迁移具有重要的作用。
cfDNA(Cell free DNA)是人体组织排放到血液、尿液或脑脊液等循环体系中的降解的DNA小片段,是一种新型的分子标记物。ctDNA(Circulating tumor DNA)特指来源于tumsor细胞的cfDNA,是液体活检主流方向。 报道表明:ctDNA羟甲基化不但可以作为tumsor分子标志物,还可用于追溯tumsor细胞的组织来源。在医疗大趋势下,ctDNA羟甲基化检测既具有极高的科研价值,又具备推进医疗临床实践的巨大潜能,为实现tumsor临床医治的全病程管理提供强有力的支持。利用ctDNA羟甲基化测序,凭一管液体就可以进行tumsor诊断、疗效评估、实时监控、个体化用药、预测复发等,是里程碑式的新型液体活检技术。ai症组中ctDNA甲基化水平与正常组差异明显。
均一的双核苷酸分布 由于“GC 覆盖度偏误”的存在,在连续双核苷酸的检出效率方面,WGBS 对于不同的双核苷酸存在较严重的偏误,而 EM-seq 则能展示出均一的覆盖情况。更强的匹配率和更低的重复率 相比于 WGBS,EM-seq 测序结果与参考基因组的匹配率更高,同时重复率更低。用更少的测序检出更多的 CpG 岛 同等测序覆盖深度的情形下,EM-seq 所发现的 CpG 数目要远多于 WGBS,在这其中有很大比例的 CpG 位点是只能能用 EM-seq 法才能检测到的。云序生物提供的MeDIP测序服务,将甲基化DNA免疫共沉淀技术(MeDIP)和高通量测序相结合,能够帮助客户快速地获取全基因组范围内的DNA甲基化图谱,并比较不同样品中的甲基化分布差异。血清、血浆、体液样品,液氮速冻后-80℃保存。样品保存期间避免反复冻融。浙江修饰表观遗传组测序结果
可用于协助评估用药疗效、复发及医治后期转移动态的监测。浙江项目表观遗传组测序分析
1)样品类型:tumsor患者的血浆、血清或 cfDNA。 血浆和血清相比较而言,推荐使用血浆,以减少淋巴细胞来源的 cfDNA 干扰。 2)样品量:血浆>5mL;血清>10mL;cfDNA>10 ng。 3)血浆提取: 使用 EDTA 抗凝管收集全血,切勿冷冻保存,只能在 2-8℃ 冰箱短暂存放,并尽快进行低温离心获取血浆。 若不能进行低温离心,则需要使用添加专有稳定剂的 STRECK 无创管来保存全血,可在常温条件下离心。 为了消除残留的细胞,血浆需要进行二次离心:first在 4℃ 条件下以 1600g 离心 10 分钟;第二次在 4℃ 条件下以 16000g 离心 10 分钟。 4)样品保存:血浆、血清样品液氮速冻后 -80℃ 冰箱保存。样品保存期间避免反复冻融。 5)样品运输:封口膜封好样品,干冰运输。浙江项目表观遗传组测序分析
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