支原体去除试剂使用后,对支原体的检测可能会有影响。一些支原体去除试剂通过特异性地与支原体膜结合、改变支原体膜的通透性来杀死支原体,而对真核细胞几乎没有影响。然而,某些情况下,去除试剂可能会对细胞的活力和形态产生一定的影响,尤其是在去除剂作用期间。此外,如果去除剂的效果不彻底,可能会导致细胞再次被支原体污染。 需要注意的...
查看详细 >>支原体检测中的PCR法和LAMP方法各有其优势和劣势,以下是两种方法的比较: PCR法 优势: 1.高灵敏度:PCR法可以扩增支原体DNA,具有很高的灵敏度。 2.操作简便:PCR操作相对简单,结果准确,速度快,通常3个小时左右即可得到结果。 3.可靠性:PCR法已成为日常细胞培养维护的可靠方法...
查看详细 >>支原体是细胞外生存的 小微生物,是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物,大小一般在0.2~0.5um之间,呈高度多形性,有球形、杆形、丝形、分枝状等多种态。 1、支原体存在于我们周围,他可能就如尘埃一样存在于我们的环境中 2、可透过一般的滤膜,所以不要寄希望于过滤可以清楚支原体污染的液体 支原体对培养细胞的污染发生...
查看详细 >>Co-IP的实验步骤: 1. 细胞裂解:首先,细胞或组织被裂解,释放其中的蛋白质。 2. 抗体结合:然后,将特异性抗体(针对已知蛋白质之一的抗体)加入到裂解物中。这些抗体会特异性地结合到目标蛋白(诱饵蛋白)上。 3. 免疫复合物形成:抗体与目标蛋白结合后,形成免疫复合物。 4. 沉淀:接着,使用蛋白A或蛋白G结...
查看详细 >>免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)是一种用于研究蛋白质相互作用和纯化特定蛋白质的实验方法。 优点: 1. 特异性强:利用特异性抗体捕获目标蛋白,可以有效地从复杂的生物样本中分离出感兴趣的蛋白质。 2. 灵敏度高:可以检测到低丰度的蛋白质,包括瞬态或弱相互作用的蛋白质复合物。 3. 应...
查看详细 >>免疫沉淀(ChIP)实验中抗体的选择非常关键,因为抗体的特异性和亲和力直接影响到实验的成功与否。 1. 特异性:抗体应当对目标蛋白具有高度的特异性,以避免与其他蛋白发生非特异性结合,导致假阳性结果。 2. 亲和力:抗体对目标蛋白的亲和力要足够高,以确保在免疫沉淀过程中能够有效地捕获目标蛋白。 3. 抗体类型:单克隆抗...
查看详细 >>细胞培养中支原体检测出现假阴性结果可能由以下原因引起: 1. 样本质量问题:如果采集的样本中含有抑制剂或者样本在处理、存储过程中出现问题,可能会影响PCR反应,导致假阴性。 2. 技术或操作问题:实验操作中的误差,如样本处理不当、试剂配制错误、仪器设备问题等,都可能导致假阴性结果。 3. 检测方法的局限性:某些检测方...
查看详细 >>细胞库支原体检测的必要性主要体现在以下几个方面: 1. 确保细胞库的质量与安全性:细胞库的建立需要为生物制品的生产提供检定合格、质量相同、能持续稳定传代的细胞。支原体检测是确保细胞库中细胞质量的重要环节。 2. 符合监管要求:支原体检测是生物制品安全性监管的一部分,全球范围内的药典、法规和指导文件中都有支原体检测的相关说明...
查看详细 >>细胞培养中,需要去除支原体的污染:支原体污染是细胞培养中 普遍的问题之一,细胞库中或正在使用的细胞中,支原体的污染率约为15%-35%。并对培养细胞的生理和代谢造成诸多影响: 01/ 争夺营养 – 阻碍细胞生长和增殖 02/ 改变蛋白质、RNA 或 DNA 合成的水平 03/ 改变基因表达、细胞信号传导和形...
查看详细 >>免疫沉淀技术的实验设计通常包括以下几个关键步骤: 1. 目标蛋白质的选择: 2. 抗体的选择:选择特异性强、亲和力高的抗体来捕获目标蛋白质 3. 样本的准备:收集和准备细胞或组织样本。 4. 蛋白质的裂解和释放:选择合适的裂解条件,如pH值、离子强度、去污剂等。 5. 蛋白质浓度的测定:确定裂解液中蛋白质...
查看详细 >>免疫沉淀技术RIP(RNA Immunoprecipitation,RNA免疫沉淀)的实验方法基于以下几个关键步骤: 1. 细胞裂解:首先,细胞或组织样本被裂解,以释放细胞内的蛋白质和RNA复合物。 2.抗体特异性结合:裂解后的样本中加入针对特定RNA结合蛋白的抗体。这些抗体能够特异性地识别并结合到目标蛋白。 3. ...
查看详细 >>免疫沉淀(ChIP)实验中抗体的选择非常关键,因为抗体的特异性和亲和力直接影响到实验的成功与否。 1. 特异性:抗体应当对目标蛋白具有高度的特异性,以避免与其他蛋白发生非特异性结合,导致假阳性结果。 2. 亲和力:抗体对目标蛋白的亲和力要足够高,以确保在免疫沉淀过程中能够有效地捕获目标蛋白。 3. 抗体类型:单克隆抗...
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